胃癌组织和细胞系中Myc诱导的核抗原Mina53的表达及其功能探讨

摘要

背景：Myc诱导的核抗原Mina53是最近几年新发现的Myc下游直接靶蛋白之一。研究表明Mina53广泛参加细胞增殖调控，与多种恶性肿瘤发生发展有关联。近年研究发现消化道肿瘤中Mina53表达明显增高，与患者的预后和生存期有关。本课题研究胃癌发生发展过程中Mina53的差异表达及其在胃癌中的作用机制，以期能够为胃癌患者的预后判断以及基因靶向治疗提供新的理论依据。
　　第一部分胃癌组织和细胞中Mina53的表达及其意义
　　目的：观察Mina53在胃癌多阶段发展过程中的定位表达情况，分析其与胃癌临床病理特征的关系，探讨其在胃癌发生发展中的作用及临床病理意义。方法：应用免疫组化技术检测60例正常胃黏膜、104例慢性非萎缩性胃炎、94例慢性萎缩性胃炎、76例上皮内瘤变及128例胃癌组织中Mina53的定位与表达差异；同时应用体外细胞培养技术检测不同分化程度的胃癌细胞系中Mina53蛋白的表达情况。结果：1. Mina53在胃癌组织中的表达水平显著高于非胃癌组胃黏膜组织（52.3％对15.3%，P＜0.01；）；2. Mina53在正常胃黏膜、慢性非萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎、上皮内瘤变及胃癌组织中表达水平逐渐增高，差异具有统计学意义（各组高表达率为0.0%，8.7%，20.2%，30.3%，52.3%，P<0.05）。3.胃癌组织中Mina53表达与病灶大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移，尤其是和TNM分期呈正相关（P<0.05），而与患者的性别、年龄及肿瘤发生部位无关。4.胃癌细胞系中Mina53的表达随着细胞分化程度的降低而显著升高（P<0.05）。结论：在胃癌发生发展过程中Mina53蛋白表达水平逐渐增高，提示Mina53有可能参与胃癌的进展，有望作为胃癌的一个肿瘤标记物。
　　第二部分胃癌细胞系中Mina53功能及其意义
　　目的：探讨研究Mina53在胃癌细胞系中的功能及其意义。方法：选用中分化的SGC7901和低分化的AGS两个胃癌细胞系，用特异性RNA小干扰敲除技术沉默Mina53后，采用流式细胞技术检测细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的变化，同时利用细胞侵袭小室实验和细胞迁移小室实验检测其侵袭和迁移能力的变化。结果：1.下调Mina53可以诱导胃癌细胞 G1期周期阻滞，从而发生细胞凋亡。2. Mina53可促进胃癌细胞的增殖。3. Mina53参与了胃癌细胞的侵袭和迁移过程。结论： Mina53在肿瘤细胞周期、细胞增殖及肿瘤侵袭转移等过程中均发挥着重要作用，提示其有望成为胃癌基因治疗的新靶点。
　　第三部分 Mina53与IL-4的相互关系探讨
　　目的：观察IL-4在胃癌发生发展不同阶段组织中的表达差异，并利用体外细胞培养技术，探讨白介素4与Mina53之间的相互作用，以期为肿瘤治疗提供新的方向。方法：选择30例正常胃黏膜、93例慢性非萎缩性胃炎、100例慢性萎缩性胃炎、50例上皮内瘤变和107例胃癌，通过免疫组化技术检测IL-4在胃黏膜中的表达情况。同时选择两个不同分化程度的胃癌细胞系，利用特异性小干扰RNA技术沉默Mina53，检测其IL-4的表达水平。结果：1.慢性胃炎中IL-4的表达水平明显高于其在胃癌中的表达（P<0.01）。2.慢性胃炎阶段时IL-4与Mina呈正相关；当胃癌发生时二者呈负相关。3.特异性下调Mina53后，IL-4的表达水平上调。4.给予IL-4刺激后，Mina53表达上调。结论：慢性胃炎时IL-4表达增高，胃癌发生后其表达降低，提示IL-4与肿瘤免疫机制密切相关；而Mina53对IL-4具有抑制作用。

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前言

第一部分 胃癌组织和细胞系中Mina53的表达及其意义

第一节 胃癌及胃癌多阶段演进过程中Mina53的表达及其意义

1.1.1 材料和方法

1.1.2 结果

第二节 胃癌细胞系中Mina53的表达及其意义

1.2.1 材料和方法

1.2.2 结果

1.2.3 讨论

第二部分 胃癌细胞系中Mina53功能及其意义

2.1 材料和方法

2.1.1材料

2.1.2 实验方法

2.2 结果

2.2.1 下调Mina53可以诱导胃癌细胞G1期周期阻滞，进而发生细胞凋亡

2.2.2 Mina53促进胃癌细胞的增殖

2.2.3 Mina53在胃癌细胞侵袭以及迁移功能的功能探讨

2.3 讨论

第三部分 Mina53与IL-4的相互关系探讨

第一节 IL-4在胃癌多阶段进展的表达

3.1.1材料和方法

3.1.2结果

第二节 胃癌细胞中Mina53和IL-4的相互作用探讨

3.2.1材料和方法

3.2.2结果

3.2.3 讨论

全文总结

参考文献

附录一

致谢

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