FGF21基因及DsbA-L基因的转录调控机制研究

摘要

目的:
　　FGF21是一种参与代谢调节的细胞因子。DsbA-L是一种与脂联素多聚体形成有关的重要调节蛋白，两者在增加胰岛素的敏感性和增加能量代谢方面具有很多有益的作用。最近研究发现FGF21能够上调DsbA-L的表达，FGF21和DsbA-L在促进脂联素的合成方面存在较多的联系。本课题拟探究FGF21和DsbA-L的转录调控机制。
　　方法：
　　通过构建两个基因的启动子荧光素酶报告质粒及其5′端系列缺失质粒，分析启动子活性。利用软件MAPPER预测关键的调控序列，通过实验验证该区域存在的关键的转录因子，并初步分析了肥胖状态下相关转录因子的调控作用。
　　结果：
　　本研究发现小鼠FGF21基因最小启动子区位于-60到-20bp（相对于TSS）；软件预测该区域存在两个潜在的Sp1结合位点。点突变分析表明，位于-46到-38bp处的Sp1结合位点在调控FGF21的表达中起主要作用；EMSA和ChIP分别从体外及体内水平验证Sp1能够特异结合到FGF21启动子区；在高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织中，Sp1的表达以及Sp1与FGF21启动子区的结合显著增加。
　　本研究成功构建人DsbA-L启动子报告基因质粒；系列缺失分析表明-1288~-2114bp区域是影响转录活性的关键碱基序列；MAPPER软件预测此区域存在一些与脂肪分化与发育有关的转录因子；比较相关转录因子在肥胖患者和正常人皮下脂肪组织中的表达情况，发现NF-кB和FOXO1在肥胖患者中表达增加，推测NF-кB和FOXO1可能是人DsbA-L基因启动子上游的调控抑制因子。
　　结论：
　　1.研究了FGF21的基本转录调控机制，首次明确Sp1调控FGF21的转录，并参与调节饮食诱导肥胖小鼠脂肪组织中FGF21的增加。
　　2.研究人 DsbA-L基因的启动子活性，并对关键上游抑制因子进行了初步预测。

目录

主要符号和缩略词说明

第一部分 成纤维细胞生长因子21的基本转录调控机制研究

引言

材料与方法

1. 实验材料与主要仪器

2. 实验方法

3. 统计学分析

结果

1. FGF21基因5′端启动子序列分析以及核心启动子区的确定

2. FGF21 基因核心启动子区潜在的 Sp1 结合位点在调控 FGF21 的转录方面发挥重要作用

3. Sp1特异结合于FGF21核心启动子区

4. Sp1特异的上调饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织中FGF21的表达

讨论

结论

第二部分 人二硫键氧化还原酶类似蛋白基因启动子克隆和上游抑制元件分析

引言

材料与方法

1. 实验材料与主要仪器

2. 方法

3. 统计学分析

结果

1. hDsbA-L基因启动子报告基因质粒及其5′端系列缺失报告基因质粒的构建及鉴定

2. 转染5′端系列缺失质粒分析hDsbA-L基因启动子区荧光素酶活性

3. hDsbAL基因启动子-2128-1302bp区域转录因子结合位点的预测

4. 相关转录因子在肥胖患者脂肪组织中的表达情况

讨论

结论

全文结论

参考文献

致谢

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