核心蛋白聚糖在肝细胞肝癌中的表达及作用机制研究

摘要

肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是我国常见的恶性肿瘤之一，预后差，通常患者在6-20个月内死亡。目前治疗原则是以外科手术治疗为主的综合治疗，非手术治疗包括局部肿瘤治疗、放射治疗、化学治疗和生物治疗，肝移植技术逐渐走向成熟，但也主要适用于早期肝癌患者，晚期患者预后不佳，加之费用昂贵、供体紧缺，不能广泛造福于患者。人们一直在探寻更为有效的治疗肝癌的药物和方法。
　　核心蛋白聚糖(Decorin，DCN)是机体重要的细胞外基质成分之一，属于富含小型亮氨酸蛋白聚糖基因家族（SLRP）的成员。有大量体外研究证实DCN能够抑制多种肿瘤细胞的增殖。其抑制肿瘤细胞的机制主要有：
　　（1）结合并抑制TGF-β生物活性，减少肿瘤发生和转移。
　　（2）DCN可以调整细胞周期，使G1期细胞数增加，S期细胞数显著降低，抑制肿瘤细胞增殖。
　　（3）DCN可诱导肿瘤细胞凋亡。因此，DCN可能作为肝细胞肝癌一种新的治疗靶点。深入的了解DCN，对于肝癌预防和治疗都具有重要的意义。
　　目的：
　　研究核心蛋白聚糖在肝细胞肝癌组织中的表达情况及其对HuH7细胞系体外增殖的影响。探讨揭示DCN与原发性肝癌发生、发展的关系，为肝癌新基因治疗靶点选择提供理论依据。
　　方法：
　　1．以免疫组织化学(SP法)分别检测16例正常肝组织、20例肝硬化组织、30例肝癌及癌旁组织中DCN的表达，采用阳性表达率及光密度值，进行半定量及定量分析。
　　2．加入含不同浓度(0、25、50、75、100、125、150、200ng／ml)DCN的培养液培养HuH7细胞系不同时间（12、24、48、72、96h、2W），用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐(MTT)法及克隆实验测定细胞增殖速度和活力，流式细胞技术测定细胞周期和凋亡情况。
　　结果：
　　1.DCN在肝硬化及癌旁组织中呈强阳性表达，阳性表达率（55％、73.3％）、平均光密度值（OD）（0.2357±0.0396、0.2983±0.1990）与正常肝组织及肝癌组织阳性表达率（0、10％）、平均OD（0.1394±0.0072、0.1589±0.0115）比较，表达有显著性差异。结果提示DCN在癌旁及肝硬化组织中呈阳性表达，在肝癌及正常肝组织中为弱阳性表达。
　　2.DCN对HuH7细胞增殖抑制作用呈浓度和时间依赖性。DCN可以调整细胞周期，使G1期细胞数增多，S期减少，G2期无变化，提示DCN可抑制肿瘤细胞由G1/S转化。DCN作用HuH7细胞后，HuH7凋亡率升高。
　　结论：
　　DCN可能作为一种负性调控蛋白参与肝癌的发生发展。体外培养HuH7细胞随DCN浓度增加及作用时间延长，细胞增殖速度减慢、活力减低，G1期细胞增多，凋亡增加。通过调节细胞周期，促进细胞凋亡，抑制肝癌细胞的增殖。DCN将可能成为一种理想的肝癌基因靶向治疗药物。

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缩略语表

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前言

文献回顾

1. DCN简介

2. DCN 作用

3. DCN 抗肿瘤作用机制

正文

实验一 DCN 在肝癌组织中的表达及其意义

0 引言

1. 实验材料

2 方法

3.实验结果

4.讨论

实验二 DCN 对 HuH7 细胞增殖影响及机制

0 引言

1.实验材料和方法

2.方法

3.实验结果

4.讨论

小 结

参考文献

附 图

个人简历和研究成果

致谢