不同pH值酸性氧化电位水对多重耐药菌及生物被膜杀灭作用的应用研究

摘要

目的：
　　1、观察不同pH值EOW对临床分离的MRSA与MDR-PA的杀灭效果。
　　2、以硅胶膜为载体，建立体外细菌生物被膜模型，明确体外生物被膜形成时间。
　　3、观察不同pH值EOW对临床分离的MDR-PA与MRSA生物被膜杀灭效果。
　　方法：
　　1、收集临床分离的MDR-PA和MRSA各十株，制备合适浓度的菌悬液备用。根据不同pH值，将EOW分为三组，pH<3.0、pH在4.0-5.0之间和pH在6.0-7.0之间，对照组为苯扎溴铵组和生理盐水组。将制备好的菌悬液加入到以上不同的处理组，采用悬液杀菌实验，监测不同pH值EOW作用1 min、3 min和5 min对MDR-PA和MRSA的杀灭效果。通过活菌计数，比较各组杀菌率。
　　2、建立生物被膜体外模型，将临床收集的MDR-PA和MRSA制成合适浓度的菌悬液备用。将硅胶膜进行高压蒸汽灭菌放入到24孔板中，加入菌悬液和培养液，培养1 d和3 d，用银染法和扫描电镜观察被膜形成情况。
　　3、将制备好的生物被膜片加入到三组不同pH值的EOW中，分别作用5 min、10 min、20 min后，观察不同pH值EOW对MDR-PA和MRSA生物被膜的杀菌效果。用平板计数法进行活菌计数，计算杀菌率；并用扫描电镜观察作用前后各组被膜形态的变化；荧光显微镜观察作用前后被膜表面死菌量的变化，评估杀菌效果。
　　结果：
　　1、通过悬液杀菌实验，三组不同pH值EOW作用1 min，对MDR-PA的杀菌率分别为98.51％、99.53%、99.74%，作用3 min和5 min，杀菌率均达100%，三组差异无统计学意义（P>0.05）。而苯扎溴铵组对MDR-PA作用1 min、3 min、5 min杀菌率分别为，48.71%、70.75%、84.51%，与三组 EOW组差异明显，有统计学意义（P<0.05）；三组不同pH值EOW和苯扎溴铵对MRSA作用1 min、3 min、5 min杀菌率均为100%，差异无统计学意义（P>0.05）。
　　2、培养1 d，银染法发现载体表面有散在的黑色斑点，扫描电镜显示硅胶膜表面有散在的菌落聚集，表明生物被膜未形成；培养3 d，银染法发现载体表面有片状黑色絮状物形成，扫描电镜显示载体表面已经形成片状的菌落聚集，表明生物被膜已经形成。
　　3、生物被膜杀菌结果显示，三组不同pH值EOW对MDR-PA生物被膜，作用5 min和10 min杀菌率均达99%以上，作用20 min均达100%，差异均无统计学意义（P>0.05）；对MRSA生物被膜作用5 min杀菌率均达99%以上，作用10 min和20 min杀菌率均达99.99%以上，差异均无统计学意义（P>0.05）。
　　4、扫描电镜在作用不同时间观察被膜形态变化，作用5min，细菌开始变皱，形态发生轻微变化，作用10 min，细菌皱折明显，个别细菌破裂，作用20 min发现大量细菌破裂。荧光染色结果显示，与对照组相比，作用5 min、10 min、20 min，死菌数量明显增多，且差异不明显，这与活菌计数一致。
　　结论：
　　1、三组不同pH值EOW对MDR-PA杀菌效果相同且均优于苯扎溴铵，对MRSA的杀菌效果与苯扎溴铵相同，但苯扎溴铵杀菌谱窄，推荐使用EOW。
　　2、以硅胶膜为载体，培养3d可以形成细菌生物被膜。
　　3、三组不同pH值EOW对MDR-PA和MRSA生物被膜杀菌效果一致，而偏中性氧化电位水，无腐蚀性且能稳定有效氯，保证杀菌效果，推荐将NEW用于临床耐药菌感染或已形成生物被膜的创面、伤口等。

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文献回顾

1 酸性氧化电位水的分类与制备

2 酸性氧化电位水的杀菌机制

3 酸性氧化电位水的应用范围

4 酸性氧化电位水的优缺点

5 偏中性氧化电位水的现状

6 不同pH值酸性氧化电位水的展望

实验一 不同pH值酸性氧化电位水对多重耐药菌体外灭菌活性的分析

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

实验二 多重耐药菌体外生物被膜模型的建立

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

实验三 不同pH值酸性氧化电位水对多重耐药菌的生物被膜体外灭菌活性的分析

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢