红海滩嗜碱放线菌分离鉴定及生物学活性研究

摘要

辽宁盘锦红海滩是生长有旺盛碱蓬草的浅海滩涂盐碱地，这种独特恶劣的自然环境蕴育着多样丰富、功能特殊的极端环境微生物资源，为我们提供了研究极端环境微生物的良好场所。极端环境微生物（包括嗜碱放线菌）在长期的生存选择压力下，演化并具有适应环境胁迫的功能基因、特殊结构和代谢产物，是发现新种、极端酶和新颖结构活性产物的重要研究材料，具有重要的研究基础和开发利用价值。
　　本研究从辽宁盘锦的红海滩土样中分离得到42株可培养嗜碱放线菌，采用形态学观察和分子生物学鉴定相结合的方法对其中的10株进行鉴定；通过酶活检测和抑菌活性分析，筛选得到活性较强的HHT-6菌株。以该菌株为实验菌株，测定其生理生化特征、生长曲线，并通过单因子实验和正交实验测定HHT-6菌株最佳发酵培养基和培养条件，主要研究结果如下：
　　1.从辽宁盘锦红海滩土样中分离得到42株嗜碱放线菌，对其中10株进行形态学观察和分子生物学鉴定，确定分属于诺卡氏菌属和链霉菌属；
　　2.酶活检测表明:在42株嗜碱放线菌中，具有产淀粉酶活性的菌株为15株，产纤维素酶活性的菌株为7株，产蛋白酶活性的菌株为14株，产过氧化氢酶活性的菌株为17株；42株嗜碱放线菌均不具有产脂肪酶和几丁质酶活性；
　　3.抑菌活性研究表明：在42株嗜碱放线菌中，仅有7株对四链球菌有抑菌作用，其中HHT-24抑菌圈半径可达8mm;HHT-14对枯草芽孢杆菌抑菌半径达5mm;42株嗜碱放线菌对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌均无抑菌作用。植物病原菌拮抗试验表明，在42株嗜碱放线菌中，只有14株对不同植物病原菌有抑制作用， HHT-6菌株对番茄灰霉病菌、向日葵核盘菌、玉米大斑0＃、玉米大斑1＃、玉米大斑2＃，五种植物病原菌均有抑菌作用，其中对向日葵核盘菌的抑菌率可达80.79％。
　　4.生理生化实验表明：HHT-6菌株对麦芽糖利用率最高，对半乳糖利用率最低；明胶液化阳性；纤维素水解阳性；硫化氢反应阴性；硝酸盐还原阴性，具牛奶胨化能力；不产生黑色素。
　　5.单因子试验和正交试验结果表明：HHT-6菌株最佳培养基配方：麦芽糖3%，硝酸钠0.15%，氯化钠0.025%，磷酸氢二钾0.075%，硫酸镁0.075%，氯化亚铁0.001%；最优培养条件：初始pH10.0，装液量为50%，120rpm发酵192h;最高耐盐量为5%。

目录

声明

第一章 引言

1.1极端环境微生物概述

1.1.1极端环境微生物

1.1.2极端环境放线菌的研究进展

1.1.3极端环境微生物研究意义

1.2红海滩环境特点及其微生物资源

1.2.1红海滩环境

1.2.2红海滩放线菌的研究

1.3嗜碱放线菌研究

1.3.1嗜碱放线菌概念、分布

1.3.2嗜碱放线菌的研究进展

1.4本研究目的意义、主要研究内容、技术路线和创新点

1.4.1研究目的意义

1.4.2 主要研究内容

1.4.3技术路线

1.4.4创新点

第二章 红海滩嗜碱放线菌的分离鉴定

2.1材料和仪器

2.1.1材料

2.1.2试剂和仪器

2.1.3培养基

2.2方法

2.2.1土样采集

2.2.2嗜碱放线菌的分离

2.2.3菌株生物学鉴定

2.3结果与分析

2.3.1嗜碱放线菌的分离

2.3.2嗜碱放线菌的鉴定

2.4结论与讨论

第三章 可培养嗜碱放线菌的生物学活性

3.1材料和仪器

3.1.1材料

3.1.2仪器和试剂

3.1.3培养基

3.2方法

3.2.1酶活性检测

3.2.2 42株放线菌生防活性研究

3.3结果与分析

3.3.1几种酶学活性检测

3.3.2 42株放线菌对19种植物病原菌的抑菌作用

3.2.3 42株放线菌对4种细菌的抑菌作用

3.4结论与讨论

第四章 可培养嗜碱放线菌HHT-6生物学特性研究

4.1材料和仪器

4.1.1材料

4.1.2仪器

4.1.3培养基

4.2方法

4.2.1菌株HHT-6生理生化特征观察

4.2.2菌株活化

4.2.3 HHT-6菌株种子液及母液的制备

4.2.4 HHT-6菌株生长曲线的测定

4.2.5 HHT-6菌株的发酵条件优化

4.3结果与分析

4.3.1放线菌HHT-6生理生化特征鉴定

4.3.2 HHT-6菌株生长曲线的测定

4.3.3 HHT-6菌株的发酵条件优化

4.4 结论与讨论

参考文献

致谢