糖基转移酶β3GnT2、β3GnT8真核表达载体和β3GnT8 RNA干扰细胞株SGC-7901的构建及β3GnT8对相关基因mRNA表达的影响

摘要

目的：构建β3GnT8 RNA干扰细胞株探讨β3GnT8对于β3GnT2、MMP2、TIMP2基因mRNA表达水平的影响以及检测β3GnT2和β3GnT8在胃癌、恶性脑胶质瘤、乳腺癌癌细胞株中表达水平并构建其真核细胞表达载体。
　　 方法：RT—PCR法检测β3GnT2、β3GnT8在上述三类癌细胞株中的表达；将β3GnT8 RNA干扰载体pSilenCircle-T8Si及对照载体转染胃癌细胞株SGC-7901,G418筛选稳定转染细胞株,RT-PCR检测β3GnT8、β3GnT2、MMP2、TIMP2 m RNA水平的表达,Western blot检测各组细胞中β3GnT8蛋白表达水平；PCR扩增带酶切位点β3GnT2、β3GnT8全长编码片段并构建真核表达载体p EGFP-C1-β3GnT2、pEGFP—C1—β3GnT8。
　　 结果：β3GnT2、β3GnT8在上述癌细胞株中均有表达,胃癌细胞株中β3GnT8表达稍高；荧光显微镜观察、RT-PCR、Western blot证实成功构建胃癌SGC-7901β3GnT8 RNA干扰下调细胞株,RT—PCR检测β3GnT2表达没有显著变化；带酶切位点β3GnT2、β3GnT8全长编码片段成功扩增并连接至pEGFP-C1载体上。
　　 结论：β3GnT2、β3GnT8共同表达于多种癌细胞株中,β3GnT8在m RNA水平影响MMP2的表达；成功克隆β3GnT2、β3GnT8全长编码片段并构建真核表达载体pEGFP—C1-β3GnT2、pEGFP—C1—β3GnT8,并构建成功β3GnT8 RNA干扰细胞株SGC-7901,为进一步的功能研究奠定了基础。

目录

文摘

英文文摘

前言

参考文献

第一部分 β3GnT2、β3GnT8真核表达载体的构建及胃癌AGS、胶质瘤U251细胞中β3GnT8 c DNA SNP的分布

1 引言

2 材料和方法

2.1 材料

2.2 方法

3 结果

3.1 β3GnT2、β3GnT8在胃癌、恶性脑胶质瘤、乳腺癌三类癌细胞株中的表达谱分析

3.2 重组载体的酶切鉴定、测序鉴定

3.3 NCBI在线软件blastx分析β3GnT8克隆片段编码氨基酸的变化

4 讨论

5 参考文献

第二部分 β3GnT8 RNA干扰胃癌细胞株SGC-7901的构建及β3GnT8与相关基因mRNA表达的变化

1 引言

2 材料和方法

2.1 材料

2.2 方法

3 结果

3.1 荧光显微镜观察RNA干扰稳定转染细胞株中GFP荧光

3.2 RT-PCR检测β3GnT8 RNA干扰效果及β3GnT2、MMP2、TIMP2 mRNA水平的表达变化

3.3 Western blot鉴定β3GnT8 RNA干扰效果

4 讨论

5 参考文献

全文小结

综述:多聚乳糖胺结构与β1,3N-乙酰氨基葡萄糖转移酶家族两个成员β3GnT2、β3GnT8研究进展

参考文献

攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文

在读期间科研成果

本课题所获的基金资助

缩略词表

致谢