多药耐药蛋白MRP4在耐ADM骨肉瘤细胞中的作用机制研究

摘要

目的：阐明阿霉素（doxorubicin，ADM）对骨肉瘤细胞系MG63，骨肉瘤耐药细胞系MG63/DOX,以及原代培养骨肉瘤耐药细胞系GSF-0686细胞体外增殖抑制作用和多药耐药蛋白MRP4在细胞耐药中的作用。
　　方法：
　　1）CCK-8法检测ADM对MG63，MG63/DOX，GSF-0686细胞的增殖抑制作用。
　　2）5μmol ADM分别作用于MG63，MG63/DOX，SF-0686三株细胞后，使用液相色谱-串联质谱法测定不同时间点三种细胞内外的ADM药物浓度。
　　3）Western Blotting法与qPCR法检测、比较三种细胞株的MRP4的表达。
　　4）加ADM刺激MG63和MG63/DOX细胞后，采用qPCR法分别检测两种细胞随加药时间和药物浓度变化时肿瘤耐药相关蛋白MRP4基因的表达。
　　结果：
　　1）ADM对MG63，MG63/DOX，GSF-0686的增殖均有抑制作用，但其对MG63/DOX和GSF-0686细胞的增殖抑制作用明显弱于MG63，有显著性差异（P＜0.05）。
　　2）MG63/DOX和SF-0686细胞内ADM浓度明显低于MG63细胞内浓度，同时MG63/DOX和SF-0686细胞外ADM浓度明显高于MG63细胞外浓度。
　　3）耐药细胞株MG63/DOX和SF-0686中MRP4的mRNA与蛋白表达量均高于亲本株MG63。
　　4）ADM可下调MG63/DOX和MG63细胞MRP4的mRNA，但在耐药株中其下调作用弱于亲本株，差异均有统计学意义（p<0.05）。
　　结论：
　　（1）ADM对MG63/DOX和GSF-0686增殖的抑制作用较弱。
　　（2）MG63/DOX细胞和SF-0686细胞对ADM耐药。
　　（3）MRP4可能通过表达上调促进细胞内药物外排参与MG63/DOX和SF-0686的耐药作用。

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引言

1 骨肉瘤治疗失败的原因分析

2 ADM耐药的分子标志物是骨肉瘤耐药研究中的亟待解决的问题

3 多药耐药相关蛋白家族与肿瘤的关系

4 骨肉瘤化疗耐药与多药耐药相关蛋白MRP相关性的研究意义

实验材料

1.细胞系

2.实验中主要化学药品及试剂胎牛血清

3.实验仪器

4.器皿及耗材，

实验方法

1. 人骨肉瘤细胞系MG63/DOX，原代骨肉瘤耐药细胞GSF-0686对ADM的耐药性及ADM对其体外抑制作用

2. 液相色谱-串联质谱法测定细胞内药物浓度

3. 检测三株细胞MG63，MG63-DOX,GSF-0686中的ABCC4表达结果MG63，MG63/DOX,GSF-0686细胞中多药耐药相关蛋白MRP4的基因表达

5 统计学处理

实验结果

2. LC/MS/MS法检测细胞内外药物浓度

3 检测三株细胞MG63，MG63-DOX,GSF-0686中的ABCC4表达结果

4. 不同时间点，不同浓度下ADM作用于MG63，MG63-DOX细胞后ABCC4的mRNA的表达结果

讨论

1 骨肉瘤多药耐药细胞株对ADM作用的抵抗性

2 多药耐药相关蛋白在骨肉瘤化疗的原发耐药中可能发挥作用

3 ADM影响MRP4的表达

结论

参考文献

致谢

攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文

附录：综述