聚维酮高络合碘溶液体外杀灭猪精液中病原微生物活性的研究及其对猪精液品质和常温保存的影响

摘要

聚维酮高络合碘溶液中碘以低毒性的络合碘存在，适当浓度的碘既能杀灭精液中的细菌和病毒，又不会伤害精子，能有效阻止细菌和病毒性传染病的垂直传播，大大保障精液的整体质量。由于对环境无污染，可以大幅度增加养殖业的安全保障。在集约化养殖模式的不断推广下，聚维酮高络合碘溶液的成功研发，为阻止病原微生物通过精液的垂直传播，进而为全国猪病的防治和净化提供了强有力的保障措施。本课题通过探究聚维酮高络合碘溶液对常见病原微生物的体外杀灭试验，证实其对临床上常见病原微生物的杀灭效果，进而探讨将其应用于家畜精液保护方面的适用性及可行性，为其在兽医生产中应用于猪精液的常温保存提供理论依据。
　　1.聚维酮高络合碘溶液的体外杀菌试验
　　为考察聚维酮高络合碘溶液的体外杀菌活性，在实验室条件下通过悬液定量杀菌试验研究了1∶50、1∶100、1∶200三种稀释度的供试品溶液对部分肠杆菌科、巴氏杆菌科和革兰氏阳性球菌的杀灭作用，考察了三种稀释度作用不同时间的平均杀菌率及杀灭范围。结果表明:0.1％卵磷脂+1.0％吐温80+0.5％硫代硫酸钠的0.03mol·L-1磷酸盐缓冲液作为中和剂，可有效中和1∶50稀释的聚维酮高络合碘溶液的残留作用;在实验室条件下，1∶50稀释的聚维酮高络合碘溶液对上述细菌作用5min后杀菌率即可达到100％;1∶100稀释的聚维酮高络合碘溶液对本试验中的大肠杆菌和沙门氏菌不同菌株作用10min的平均杀菌率均大于99％，对本试验中的革兰氏阳性球菌的平均杀菌率均大于99.9％;1∶200稀释的聚维酮高络合碘溶液杀菌效果不理想。由以上试验结果可知:低于100倍稀释倍数的聚维酮高络合碘溶液具有良好的杀菌效果。
　　2.聚维酮高络合碘溶液对PRRSV、TGEV体外杀毒作用的研究
　　本试验研究了聚维酮高络合碘溶液和聚维酮碘对Marc-145和PK-15细胞的毒性作用，同时采用MTT法考察了两种测试物对PRRSV、TGEV病毒增殖的影响，进行了阻断、抑制和直接杀灭PRRSV和TGEV效果的试验。结果如下:聚维酮高络合碘溶液对Marc-145和PK-15的最大无毒浓度分别为312.50μg·mL-1和156.25μg·mL-1，聚维酮碘对Marc-145和PK-15细胞的最大无毒浓度分别为2.44μg·mL-1和1.22μg·mL-1，在安全浓度以下均不会明显引起细胞损伤，对细胞无毒性作用;阻断试验结果表明聚维酮高络合碘溶液在安全浓度1.22～312.50μg·mL-1内对PRRSV的阻断作用极显著(P＜0.01)，在安全浓度1.22～156.25μg·mL-1内对TGEV的阻断作用极显著(P＜0.01);抑制试验结果表明聚维酮高络合碘溶液在安全浓度2.44～312.50μg·mL-1内对PRRSV在Marc-145细胞上的增殖具有极显著的抑制作用(P＜0.01)，在安全浓度4.88～156.25μg·mL-1内对TGEV在PK-15细胞上的增殖具有极显著的抑制作用(P＜0.01)，直接杀灭试验结果表明聚维酮高络合碘溶液在浓度范围0.15～312.50μg·mL-1内对PRRSV有极显著的直接杀灭作用(P＜0.01)，聚维酮高络合碘溶液在浓度19.53～156.25μg·mL-1内对TGEV有极显著的直接杀灭(P＜0.01)作用。结果表明:聚维酮高络合碘溶液在安全范围内对两种病毒的杀灭效果比较明显，可以为临床上开发聚维酮高络合碘溶液作为猪精液保护剂从源头上杜绝精液中疾病的垂直传播提供参考。
　　3.聚维酮高络合碘溶液对公猪精液品质和存活时间及存活指数的影响
　　本试验通过对公猪精液品质、存活时间和存活指数等指标的测定，考察了聚维酮高络合碘溶液三种稀释度(1∶50、1∶100、1∶200)使用后对猪精子质量的影响，探究将其应用于家畜精液保护的可行性。结果显示:1∶100稀释的聚维酮高络合碘溶液对17℃保存的猪精子质量的常规指标无影响，精子的有效存活时间可以达到90h，总存活时间最高可达300h，存活指数最高为105.3，结果均好于对照的聚维酮碘组，1∶50、1∶200稀释时精液的保护效果不如1∶100稀释。结论:综合考虑各种因素按剂量1∶100稀释使用的聚维酮高络合碘溶液对猪精液的常温保存效果较好。
　　4.聚维酮高络合碘溶液和聚维酮碘对猪精液中细菌杀灭效果的研究
　　本试验通过研究聚维酮高络合碘溶液和聚维酮碘的三种稀释度(1∶50、1∶100、1∶200)使用后1h对猪精液中细菌杀灭效果的研究，采用琼脂倾注平板计数菌落法考察了两种供试品溶液对猪精液中细菌的杀灭效果。结果显示:1∶100稀释的聚维酮高络合碘溶液作用1h后能有效杀死猪精液中的大部分细菌。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

第一章 公猪精液保存的研究进展

1 冷冻保存概述

1．1 冷冻保存研究进展

1．2 冷冻保存原理

1．3 影响猪精液冷冻保存的因素

1．4 精液的冷冻方法

1．5 精液的解冻方法

2 低温保存概述

2．1 低温保存研究进展

2．2 低温保存原理

2．3 低温保存方法

3 常温保存概述

3．1 常温保存研究进展

3．2 常温保存原理

3．3 影响猪精液常温保存的因素

第二章 聚维酮碘应用研究进展

1 结构组成

2 作用机理

3 制剂类型

4 毒性研究

4．1 PVP-Ⅰ的急性毒性试验研究

4．2 PVP-Ⅰ的蓄积毒性试验研究

4．3 PVP-Ⅰ的亚慢性毒性试验研究

4．4 PVP-Ⅰ的致突变试验研究

4．5 PVP-Ⅰ的生殖发育毒性试验研究

4．6 PVP-Ⅰ的刺激性试验研究

4．7 PVP-Ⅰ的细胞毒性试验研究

5 临床应用

参考文献

试验一 聚维酮高络合碘溶液的体外杀菌试验

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果

2．1 中和剂鉴定试验结果

2．2 实验室杀菌试验结果

3 讨论

3．1 中和剂的选择

3．2 聚维酮高络合碘溶液的杀菌效果分析

3．3 试验菌的选择

4 小结

参考文献

试验二 聚维酮高络合碘溶液对PRRSV、TGEV体外杀毒作用的研究

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

1．3 数据处理

2 结果

2．1 PRRSV和TGEV的TCID50测定结果

2．2 聚维酮高络合碘溶液、聚维酮碘分别对Marc-145细胞和PK-15细胞的安全浓度

2．3 细胞培养与细胞病变(CPE)

2．4 聚维酮高络合碘溶液对PRRSV、TGEV感染细胞的阻断作用

2．5 聚维酮高络合碘溶液对PRRSV、TGEV增殖的抑制作用

2．6 聚维酮高络合碘溶液对PRRSV、TGEV的直接杀灭作用

3 讨论

4 小结

参考文献

试验三 聚维酮高络合碘溶液对公猪精液品质和存活时间及存活指数的影响

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

1．3 数据处理

2 结果

2．1 精液的品质评定结果

2．2 精子的活力测定结果

2．3 精子的密度测定结果

2．4 聚维酮高络合碘溶液和聚维酮碘对种公猪精子存活时间及存活指数的测定结果

3 讨论

3．1 精液稀释及保存要求

3．2 精子活力测定条件的选择

3．3 精液常温保存效果分析

4 小结

参考文献

试验四 聚维酮高络合碘溶液和聚维酮碘对猪精液中细菌杀灭效果的研究

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

1．3 数据处理

2 结果

2．1 聚维酮高络合碘溶液和聚维酮碘作用1h后对猪精液细菌的杀灭效果

3 讨论

4 小结

参考文献

全文结论

致谢