Bex2对人脑胶质瘤干细胞分化增殖影响的体外实验研究

摘要

目的：构建Bex2(brain expressed X-linked，Bex2)真核表达载体转染人脑胶质瘤干细胞，以观察Bex2对脑胶质瘤干细胞分化增殖的影响，为胶质瘤的基因治疗提供理论基础。 方法： 1.以Trizol一步法提取人脑胶质细胞的总RNA为模板，采用RT-PCR法获得Bex2的cDNA；用T载体连接后；连接产物转化大肠杆菌JM101进行筛选、序列测定正确，双酶切后将Bex2与质粒pcDNA3.1(+)连接成功。 2.取人脑胶质瘤手术标本制备单细胞悬液后，加入生长因子EGF、bFGF和B27类似神经干细胞条件培养基中克隆培养。待细胞悬浮形成脑肿瘤干细胞球时备用。 3.真核载体联合脂质体转染体外培养的肿瘤干细胞，分别于转染后18 h、36 h、48 h、72 h、96 h观察基因Bex2在脑胶质瘤干细胞的表达。 4.随机化分三组：实验组，空载体组，空白对照组。5.各组均在干扰18 h、36 h、48 h、72 h、96 h后收集细胞，MTT法检测胶质瘤干细胞生长抑制率，用Hoechst染色试剂盒检测胶质瘤干细胞的凋亡情况，用Western-blot检测Bex2基因的表达。 结果： 1.成功构建后天性沉默基因Bex2的真核表达载体； 2.基因Bex2在转染胶质瘤干细胞后18h即有表达，48h达到高峰，以后逐渐下降； 3.MTT法检测结果显示，在转染肿瘤干细胞36h、48 h、72h、96h时实验组细胞生长抑制率明显高于空载体组和空白对照组(P<0.05)；转染72 h时实验组细胞生长抑制率高于同组的18 h、36 h、48 h和96 h(P<0.05)； 4.在应用Hoechst染色检测细胞凋亡显示，在转染36h、48 h、72h、96h时实验组细胞凋亡率明显高于空载体组和空白对照组(P<0.05)；72h时实验组细胞凋亡率高于同组18h、36h、48h和96h(P<0.05)。 结论：Bex2能够抑制脑胶质瘤干细胞增殖和生长，促进胶质瘤干细胞凋亡。

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论文说明:缩略词表

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前言

材料与方法

1.材料

2.方法

结果

讨论

结论

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参考文献

综述 胶质瘤基因治疗载体的研究及展望

攻读硕士学位期间发表学术论文题目

临床培训小结

致谢