雄性小鼠减数分裂启动相关蛋白谱系的构建及初步的功能研究

摘要

减数分裂是生殖细胞不同于体细胞所特有的细胞分裂方式，在减数分裂启动过程中有许多基因与蛋白的表达与之密切相关。小鼠胚胎原始生殖细胞PGC迁移到生殖嵴并在此定位以及性别决定基因SRY表达后，雌性生殖嵴中较高浓度的维甲酸(retinoic acid，RA)诱导生殖细胞表达Stra8(stimulated by retinoic acidgene8)，减数分裂启动并阻滞在第一次减数分裂前期的双线期，而雄性生殖细胞至出生后才开始启动减数分裂。已知RA是雌性和雄性生殖细胞减数分裂启动和正常进行的关键。但目前对于RA信号通路调控减数分裂启动的下游机制仍存在较大的争议，至今未形成一个完整的调控网络。
　　本研究以ICR小鼠为模式动物，运用蛋白质组学技术，构建了雄性小鼠减数分裂启动的特定时间点（PND8.5和PND10.5）的差异蛋白表达谱，筛选出差异倍数在1.5倍以上的104个蛋白，结合生物信息学分析这些差异蛋白在减数分裂启动过程中的作用，挑选出5个与RA信号通路密切相关的候选蛋白，通过Western Blot技术对这些蛋白在谱系中的变化趋势进行了验证;进一步我们利用定量Real-time PCR的方法，结合小鼠精原干细胞体外培养的技术平台，研究体外RA诱导后下游候选基因的表达变化。最后，我们挑选PDCD4(programmed cell death4)蛋白开展初步功能研究，明确PDCD4在不同时间点小鼠睾丸组织中的细胞定位，推测其在精子发生过程中与精原细胞的正常分化，顺利进入减数分裂阶段密切相关。综上所述，对这些差异蛋白的鉴定及其功能分析为研究减数分裂相关基因和蛋白对精子发生的调控作用奠定基础，也为临床治疗男性不育提供大量潜在的分子靶标。

目录

声明

摘要

前言

实验材料与方法

实验材料

实验方法

实验结果

1．雄性小鼠减数分裂启动特定时间点的确定

2．雄性小鼠减数分裂启动差异蛋白的鉴定

3．运用生物信息学对差异蛋白功能进行分析

4．运用Western Blot方法验证差异蛋白在谱系中的表达趋势

5．小鼠精原干细胞体外维甲酸诱导后基因表达变化

6．PDCD4的免疫组织化学定位分析

讨论

小结

参考文献

维甲酸信号通路在精子发生中的作用

硕士在读期间发表论文

致谢