SRAP标记在DUS测试中的应用与高分辨率双向电泳体系的建立

摘要

SRAP标记具有操作简便快速、成本低、可信度高、易于测序等特点,已在马铃薯、水稻、苹果、油菜等多种植物得到了广泛的应用。本研究通过对影响SRAP标记PCR结果的因素,包括Mg2+、dNTPs、引物、Tag酶的浓度以及退火温度等的优化,建立了莴苣属蔬菜的SRAP-PCR反应体系:即在20μl反应体系中,模板DNA为50ng;Mg2+浓度为2.0mM;dNTPs浓度为0.2mM;引物浓度为0.75uM,Tag酶用量为1U。适宜的扩增程序为先94℃预变性5min,接着的5个循环按94℃变性1min、35℃复性1min、72℃延伸1min的程序进行;之后的30个循环将复性温度提高到51℃,其他的条件保持不变,最后72℃延伸7min。
　　采用18对SRAP标记和40个用于DUS(特异性、一致性和稳定性)测试的形态学标记对50份莴苣材料进行遗传多样性分析,其中SRAP引物在不同品种间的多态信息含量(PIC)在0.39~0.97之间,平均值为0.80。使用UPGMA算法对所有材料进行聚类分析,SRAP分子标记聚类和形态学聚类都将所有材料划分成三类,对两种标记所得的结果进行相关性分析得出两者的相关系数为0.5455,表明两种结果具有较好的相关性和符合度。采用21对SRAP标记和54个用于DUS测试的形态学标记对28个不同的西瓜品种进行遗传多样性分析,其中SRAP引物在不同品种间的多态信息含量(PIC)在0.525~0.892之间,平均值为0.720,各材料间相似系数在0.92至0.99之间,而形态学标记计算结果为0.50到0.85之间。采用UPGMA法对所有材料进行聚类分析,SRAP标记聚类将所有材料划分成四类,形态学标记划分为五类,两种标记的相关系数为0.218,相关性不是很高,但在品种鉴定和区别上SRAP标记表现出一定的优越性,可以作为西瓜DUS测试的一种很好的补充。
　　采用IPG-DALT-six系统,借鉴水稻、拟南芥等模式植物的2-DE技术并加以改进,建立了适合生菜叶片的2-DE分离分析体系,并初步分析了生菜叶片蛋白的等电点、分子量以及相对含量的分布情况,为进一步研究生菜蛋白质组提供了技术基础。

目录

摘要

Abstract

缩略词表

第一章 文献综述

1.1 SRAP标记技术及其在蔬菜作物研究中的应用

1.1.1 SRAP标记技术

1.1.2 SRAP标记在蔬菜作物研究中的应用

1.2 双向电泳技术及其在蔬菜作物蛋白质组研究中的应用

1.2.1 蛋白质双向电泳技术研究现状

1.2.2 双向电泳技术在蔬菜作物中的应用

1.2.3 讨论

1.3 本研究的目的及意义

第二章 莴苣属蔬菜资源SRAP标记PCR体系的构建与优化

2.1 引言

2.2 材料与方法

2.2.1 材料与试剂

2.2.2 试验方法

2.3 结果与分析

2.3.1 DNA提取方法的确定

2.3.2 对参与SRAP反应体系的各反应物浓度的优化

2.3.3 退火温度

2.3.4 PCR产物检测

2.3.5 SRAP-PCR体系及反应参数的稳定性检测

2.4 讨论

第三章 形态学标记和SRAP分子标记在莴苣DUS测试中的应用

3.1 引言

3.2 材料与方法

3.2.1 材料与试剂

3.2.2 实验方法

3.3 结果与分析

3.3.1 SRAP扩增结果

3.3.2 SRAP扩增聚类分析

3.3.3 形态学聚类分析

3.3.4 分子标记与形态学标记的相关性

3.4 讨论

第四章 SRAP分子标记在西瓜DUS测试中应用的可行性验证

4.1 引言

4.2 材料与方法

4.2.1 材料与试剂

4.2.2 SRAP测试

4.2.3 形态学测试

4.2.4 数据收集和分析方法

4.3 结果与分析

4.3.1 SRAP扩增结果

4.3.2 SRAP扩增聚类分析

4.3.3 形态学聚类分析

4.3.4 分子标记与形态学标记的相关性

4.4 讨论

第五章 适用于生菜蛋白质组分析的高分辨率双向电泳方法

5.1 引言

5.2 材料与方法

5.2.1 供试材料

5.2.2 试剂配置

5.2.3 蛋白质提取

5.2.4 蛋白浓度测定

5.2.5 双向电泳

5.2.6 凝胶染色及分析

5.3 结果与分析

5.3.1 等电聚焦时间选择

5.3.2 不同染色方法比较

5.3.3 双向电泳分辨率和重复性

5.3.4 生菜叶片总蛋白质的特征

5.4 讨论

参考文献

致谢

附录

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