蛋白激酶C—核因子-Kappa B信号传导通路在妊娠高血压疾病患者胎盘血管病变机制中作用的研究

摘要

目的妊娠高血压疾病患者胎盘血管内皮细胞损伤后释放一系列生长因子及细胞因子可促进血管平滑肌细胞增殖及细胞外基质的合成，但其具体的信息通路不明，本文通过检测妊娠高血压疾病患者胎盘组织前胶原Ⅰ、ⅢmRNA及蛋白激酶C-核因子-kappaB(PKC-NF-κB)信息分子蛋白的表达以及PKC-NF-κB信号传导通路对子痫前期患者脐静脉血清诱导脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)增殖及前胶原Ⅰ、ⅢmRNA表达中的影响，旨在探讨PKC-NF-κB信号传导通路在妊娠高血压疾病患者胎盘血管病变机制中的作用。 资料与方法: 1.标本来源1)收集同济医院妇产科住院病人共51例。其中正常足月妊娠剖宫产孕妇10例；妊娠高血压疾病剖宫产孕妇41例{其中妊娠期高血压(GH)10例，子痫前期(PE)轻度11例，子痫前期重度20例}，两组病例在年龄，孕周上无显着性差异，所有病例均为单胎妊娠，无肝肾疾病、糖尿病、感染、原发性高血压及其他心血管疾病史；2)HUASMC原代培养：收集同济医院妇产科住院病人共100例，其中正常足月妊娠剖宫产孕妇80例；子痫前期剖宫产孕妇20例脐静脉血各30-50mL制备血清。取正常足月妊娠剖腹产术病人脐动脉平滑肌进行培养(组织块培养法)，取三至五代细胞进行后续实验。 2.研究方法:1.HE染色测定胎盘组织细小动脉管壁面积占血管总面积的百分比(WA/TA)及细小动脉管腔面积占血管总面积的百分比(VA/TA)；2.RT-PCR测定胎盘组织前胶原Ⅰ、ⅢmRNA含量；3.免疫组化、图像分析等方法测定胎盘绒毛细小血管PKC-α及NF-κBp65的表达及对绒毛血管病变进行综合评价；4.WesternBlot分析胎盘组织胞膜及胞浆PKC-α、胞浆核因子-kappaB抑制因子(I-κB)及胞核NF-κBp65含量；5.分离与培养脐动脉平滑肌细胞；6.加或不加PKC抑制剂多黏菌素B(PMB)作用30分钟后分别加入PKC激动剂12-肉蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)及子痫前期患者脐静脉血清，培养2h后，WesternBlot测定细胞胞浆I-κB、胞核的NF-κBp65活性；细胞培养48小时后，MTT测定细胞活力，流式细胞学测定细胞周期，RT-PCR测定HUASMC前胶原Ⅰ、ⅢmRNA的表达。 3.统计方法：实验数据以均值±标准差(x±s)表示，采用SPSS软件进行统计学分析，两组间数据比较采用t检验，多组间数据比较采用方差分析及q检验。P＜0.01表示差异有显著性。 结果:1.HE染色显示子痫前期胎盘细小血管管壁增厚、管腔狭窄、管壁纤维素样坏死、急性粥样硬化显著高于对照组(p＜0.01)；2.子痫前期胎盘细小血管(WA/TA)较正常妊娠组及妊娠期高血压明显增高，差异有显著性(p＜0.01)；3.RT-PCR结果显示子痫前期患者胎盘绒毛组织前胶原ⅠmRNA明显高于对照组(P＜0.01)；4.免疫组化显示子痫前期患者胎盘绒毛细小动脉(直径约100μm～200μm)PKC-α及NF-κBp65显色强度明显高于对照组(＜0.01)；5.WesternBlot结果显示子痫前期患者胎盘组织PKC-α及NF-κBp65均明显高于对照组，胞浆I-κB明显低于对照组(＜0.01)；6.盘绒毛细小动脉管壁PKC-α及NF-κBp65的表达与细小动脉中膜平滑肌细胞核密度及胎盘绒毛组织前胶原ⅠmRNA的表达均呈正相关；7.PMA组及子痫前期患者血清组HUASMC的胞浆I-κB表达明显低于对照组，胞核NF-κBp65表达、细胞活力、前胶原ImRNA的表达、S及G2/M期细胞百分比明显高于对照组(p＜0.01)，G0+G1期细胞百分比明显低于妊娠组(p＜0.01)；8.PMB预处理可以抑制PMA及子痫前期患者脐静脉血清引起的NF-κB核转位、细胞活力、前胶原ⅠmRNA的表达(p＜0.01)，G0+G1期细胞百分比明显增加(p＜0.01)。 结论：1.前胶原ⅠmRNA的表达增加在子痫前期患者胎盘血管病变过程中起重要作用。2.子痫前期患者胎盘血管内皮细胞损伤后平滑肌细胞病变过程中存在PKC-α-NF-κB信号传导通路；3.子痫前期患者脐静脉血清可激活脐动脉平滑肌细胞PKC-α-NF-κB信号传导通路；4.子痫前期患者脐静脉血清可刺激脐动脉平滑肌细胞增殖活性及前胶原ⅠmRNA的表达；5.PKC-α-NF-κB信号传导通路在子痫前期患者脐静脉血清可诱导脐动脉平滑肌细胞增殖及前胶原ⅠmRNA的表达过程中起信息中介作用；6.PKC-NF-κB信号传导通路的激活在子痫前期患者胎盘血管病变过程中可能起重要作用。

目录

缩略语一览表

第一部分：妊娠高血压疾病患者胎盘组织病理变化及前胶原Ⅰ、ⅢmRNA的表达及意义

研究背景

材料与方法

结果

讨论

参考文献

研究背景

材料与方法

结果

讨论

参考文献

研究背景

资料与方法

结果

讨论

参考文献

全文小结

蛋白激酶C在血管平滑肌细胞表型及功能改变过程中作用的研究进展

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