NF-κB特异性抑制剂PDTC对人肺癌细胞系A549增殖及AEG-1表达的影响

摘要

目的
　　研究NF-κB特异性抑制剂PDTC(pyrrolidinedithiocarbamate)对人非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡及星形细胞上调基因AEG-1表达的影响，为进一步了解PDTC体外抗肺癌作用的价值及机制，为肺癌预防和治疗提供重要的实验室基础和依据。
　　方法
　　1.体外培养人非小细胞肺癌A549细胞株，用不同浓度(25、50、100、200μmol/L)的PDTC处理A549细胞，分别于24、48和72h后，噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞光密度值，分析PDTC对细胞增殖的抑制作用;
　　2.流式细胞术检测药物处理后细胞的周期变化情况;
　　3.Hoechst33342荧光染色观察药物处理后细胞形态变化情况;
　　4.RT-PCR检测AEG-1的mRNA表达情况;
　　5.采用SPSS17.0统计软件分析所有检测数据，进行均值、标准差计算，并做相应的统计分析，结果用均数±标准差表示。多样本均数比较时，经方差齐性检验后，若方差齐性则采用单因素方差分析（F检验），若不符合方差齐性则采用Kruskal-Wallis检验。以P＜0.05为有统计学意义。
　　结果
　　1.MTT结果显示:PDTC能有效抑制A549细胞的生长，各浓度处理组的细胞经不同时间处理后，其增殖抑制率与同一组同一时间点的对照组相比，肿瘤细胞增殖活性明显受到抑制，差异有统计学意义(P＜0.05)，并且具有时间和剂量依赖性;
　　2.PDTC能改变A549细胞的周期分布，作用后细胞的G0/G1期细胞比例上升。各浓度组的细胞周期分布与同一时间点对照组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)，呈时间和剂量依赖性。
　　3.Hoechst33342荧光染色后显微镜下观察显示:药物作用组细胞形态不规则，有典型的细胞核凝聚特征并出现凋亡小体等明显凋亡改变;
　　4.RT-PCR和Westernblot结果显示:随着PDTC浓度的增加及作用时间的延长，癌细胞内AEG-1mRNA和蛋白表达水平显著降低，与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论
　　PDTC可以抑制A549细胞的增殖、改变其周期分布、诱导其凋亡，且呈一定的剂量和时间依赖性，其机制可能与PDTC抑制NF-κB、下调AEG-1表达有关。

目录

声明

摘要

英文缩略词

引言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 结果判断

4 统计学处理

结果

1 体外培养人非小细胞肺癌A549细胞的生长状态

2 MTT法检测PDTC对A549细胞增殖抑制率的影响

3 流式细胞术检测细胞周期分布

4 Hoechst33342染色后细胞形态变化

5 RT-PCR检测PDTC对AEG-1基因mRNA表达的影响

6 Western blot检测PDTC对AEG-1基因蛋白表达的影响

讨论

结论

参考文献

综述 AEG-1与肿瘤关系的研究进展

个人简历

致谢