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牛白细胞粘附缺陷病(BLAD)诊断及白细胞功能研究

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第一章前言

第二章中文综述

第三章材料与方法

第四章结果与分析

第五章讨论

第六章结论

参考文献

致谢

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摘要

白细胞粘附缺陷病(Bovineleukocyteadhesiondeficiency,BLAD)是一种常染色体隐性致死性的遗传性疾病,以严重的重复性感染、缺少脓液形成、损伤愈合延迟和白细胞增多症为特征。其病因与人的白细胞粘附缺陷病(Leukocyteadhesiondeficiency,LAD)相同,命名牛的白细胞粘附缺陷病。BLAD是由于编码整合素β亚单位(CD18)的383位碱基由A突变为G所造成的,与之相应的128位的天门冬氨酸变成了甘氨酸,致使白细胞表面的β2整合素表达明显减少或缺乏。 为了诊断白细胞粘附缺陷病,根据牛白细胞粘附缺陷病病因,采用RT-PCR(reversetranscriptasePCR)扩增含有整合素β亚单位383位碱基的基因片段、再用TaqⅠ酶切PCR产物的检测方法,同时结合临床血液学变化和病史进行诊断。确诊一头4岁的荷斯坦母牛为白细胞粘附缺陷病病牛,2头3个月龄的犊牛为白细胞粘附缺陷病携带牛。病牛的白细胞总数为82.6×109个/L,携带牛白细胞总数为14.7×109个/L,健康牛白细胞总数为23.5×109个/L,病牛的白细胞总数明显地高于携带牛和健康牛。 为了澄清BLAD病牛和携带牛的白细胞功能变化情况,对白细胞的趋化反应、吞噬酵母菌和金黄色葡萄球菌的能力进行了检测和分析。结果BLAD病牛白细胞的的趋化反应比健康牛、携带牛明显降低,而携带牛和正常牛相比趋化反应仅略有下降;BLAD牛的白细胞对酵母菌吞噬能力比健康牛、携带牛有显著降低,吞噬率为10%,携带牛的白细胞对酵母菌的吞噬能力和健康牛相比没有明显变化,携带牛白细胞吞噬率为89%,健康牛白细胞吞噬率为92%;BLAD牛白细胞吞噬金黄色葡萄球菌的能力和健康牛、携带牛相比没有明显的差异。这说明在BLAD病牛,与CD11/CD18粘附分子相关的白细胞功能显著降低,而非依赖于CD18的功能却没有明显变化。 此外,为了解白细胞对不同金黄色葡萄球菌菌株吞噬能力的差别,试验检测了健康牛白细胞对23株金黄色葡萄球菌的吞噬能力。结果白细胞对不同金黄色葡萄球菌株细菌的吞噬数量有明显的不同,吞噬60分钟时,培养基上所剩的菌数与0分钟相比为23-305.2%不等;吞噬120分钟时,培养基上所剩的菌数与0分钟相比为10-1219.4%不等。这一结果说明不同金黄色葡萄球菌株抗吞噬能力有很大的差异。

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