siRNA抑制K562细胞中内源性c-Myc与hTERT基因表达的研究

摘要

RNA干扰((RNAi)是一种首先在线虫中发现的序列特异性的转录后基因沉默现象(PTGS)，由双链RNA(double-strandedRNA，dsRNA)启动，导致具有同源序列的目的mRNA降解。RNAi技术能抑制显性等位基因或突变基因的表达，甚至单核苷酸多态性，治疗肿瘤和遗传性疾病，能减少非特异作用引起的副作用。本研究利用体外转录合成的小分子干扰RNA(siRNA)抑制红白血病细胞系K562细胞中hTERT和内源性c-Myc基因的表达，研究hTERT、c-Myc基因的表达与端粒酶活性的关系，及抑制hTERT、c-Myc基因的表达与细胞增殖与凋亡之间的关系。　　1.特异性siRNA对c-Myc基因表达的影响　　人红细胞白血病细胞系K562常规培养备用。体外转录方法合成c-Myc的siRNA，siRNA转染K562细胞。培养48小时，收集细胞进行分析。荧光定量RT-PCR检测c-MycmRNA的表达，westernblot检测c-Myc蛋白的表达，计算siRNA的抑制率；　　2.特异性siRNA抑制c-Myc、hTERT基因表达后端粒酶活性的变化　　人红细胞白血病细胞系K562常规培养备用。c-Myc特异性siRNA转染K562细胞，研究内源性c-Myc与hTERT基因活性、端粒酶活性的关系；同时利用体外合成的siRNA抑制hTERT的表达，研究hTERT基因与端粒酶活性的关系。　　3.抑制内源性c-Myc与hTERT基因表达时细胞凋亡、增殖活性的变化　　K562细胞转染c-Myc和hTERT基因特异性siRNA，分析细胞增殖与凋亡的变化。用MTT法检测细胞增殖状况，流式细胞仪、荧光显微镜检测细胞凋亡状况，观察siRNA对细胞凋亡的影响。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词表

前言

第一章应用siRNA抑制K562细胞内源性c-Myc的表达

1材料与方法

2结果

3讨论

第一章附图

第二章siRNA抑制内源性c-Myc、hTERT基因表达后端粒酶活性的变化

1材料与方法

2结果

3讨论

第二章附图

第三章抑制c-Myc与hTERT基因表达后细胞增殖和凋亡的变化

1材料与方法

2结果

3讨论

第三章附图

小结

参考文献

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致谢

原创性声明