LC-MS/MS法测定小鼠血浆和脑组织中LJP1207含量并应用于药代动力学研究

摘要

哺乳动物的血浆和组织中均含氨基脲敏感型胺氧化(semicarbazide-sensitive amine oxidase,SSAO),SSAO含量升高会引发各种炎症及心脑血管疾病。肼类化合物LJP1207[N’-(2-phenyl-allyl)-hydrazine hydrochloride]对SSAO活性具有很强的抑制能力,并且特异性高,在治疗急慢性炎症及老年性痴呆疾病有显著效果,但是LJP1207在生物样本中不稳定。因此,本研究应用液相色谱串联质谱技术(LC-MS/MS),建立了简单快速的BALB/C小鼠血浆和脑组织中LJP1207含量的测定方法,并将这个方法成功的应用于LJP1207的药代动力学研究。
　　主要研究内容和方法:
　　一、小鼠血浆和脑组织中LJP1207的含量测定
　　待测样本经乙腈沉淀蛋白质后用乙酰丙酮进行衍生化(30℃水浴30min),而后再用C18固相萃取小柱进行萃取、浓缩。样本采用Waters Symmetry C18柱(2.1×50mm,3.5μm)进行分离,以甲醇-10mM的醋酸铵水溶液(pH5.0)(75:25,v/v)为流动相,流速为0.2mL/min,用ESI源进行离子化,以多反应监测(MRM)方式进行检测,用于定量的离子对为m/z213→117。
　　二、LJP1207在BALB/C小鼠及SD大鼠体内的药代动力学研究
　　BABL/C小鼠与SD大鼠分别经腹腔给药30mg/kg后,BABL/C小鼠于0(对照)、3、6、9、12、15、30、45、60、90和120min取血与脑组织;SD大鼠于0(对照)、5、15、30、45、60、90、120、360和720min取血。
　　将收集于1.5mL塑料离心管中的全血立即离心(1,600×g,4min)并将所得血浆收集,吸取所得血浆50μL,与50μL的5％乙酰丙酮水溶液混合,冻存于-80℃冰箱待测;脑组织样本取出并称量后立即冻存于-80℃,测定时取出脑组织样本,用乙腈沉淀蛋白后进行离心,而后用乙酰丙酮进行衍生化。血浆和脑组织样本均经过固相萃取,而后采用LC-MS/MS法测定LJP1207浓度。
　　研究结果:
　　一、本研究建立了快速、灵敏、准确的LC-MS/MS法,既可用于血浆中LJP1207的含量的测定,也可用于脑组织中LJP1207的含量测定。其中血浆和脑组织中LJP1207的线性范围分别为0.1-8μg/mL和0.1-8μg/g。血浆中LJP1207的检测限和定量限为0.9和2.8ng/mL,而脑组织的检测限和定量限为7.7和22.8ng/g。样本的日内和日间差均小于10%;该方法的相对回收率为98.5-109%。
　　二、LJP1207在血浆和脑组织中的动力学特征相似。BAB/C小鼠血浆主要动力学参数为:曲线下面积(AUC)为159μgminmL-1,半衰期(T1/2)为13.7min,清除率(CL)为189mL/min;BALB/C小鼠脑组织主要动力学参数为:曲线下面积(AUC)为139μg·min/g,半衰期(T1/2)为10.0min,清除率(CL)为216mg/min;SD大鼠血浆主要动力学参数为:曲线下面积(AUC)为214μg·min/mL,半衰期(T1/2)为25.3min,清除率(AUC)为150mL/min。

目录

声明

摘要

ABSTRACT

缩略词表

前言

第一章血浆和脑组织中LJP1207分析方法的建立

1仪器与试剂

1.1试剂

1.2仪器

2分析方法的建立

2.1LJP1207的合成

2.2生物样本预处理

2.3LC-MS/MS条件

2.4分析方法的验证

3实验结果与讨论

3.1LJP1207的合成

3.2生物样本的预处理

3.3LC-MS/MS条件的选择与建立

3.4分析方法的验证

4结论

第二章LJP1207在BALB/C小鼠及SD大鼠体内药代动力学研究

1材料与试剂

1.1试剂

1.2仪器

1.3实验动物

2实验方法

2.1样本采集及预处理

2.2血浆和脑组织中LJP1207含量测定

2.3药代动力学研究

2.4LJP1207对BALB/C小鼠脑组织中SSAO酶活性的抑制作用

3实验结果与讨论

3.1样本预处理

3.2药代动力学结果

3.3SSAO对小鼠脑组织中酶活性的影响

4结论

参考文献

综述

SSAO概述及其抑制剂的分类

一SSAO概述

二SSAO抑制剂的分类

1非选择性抑制剂

2选择性抑制剂

3选择性SSAO抑制剂---同时增强MAO活性

三总结

参考文献

附录

致谢