川芎嗪对长波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞衰老的拮抗作用及其机制研究

摘要

目的:
　　本研究旨在通过观察人皮肤成纤维细胞(Human Dermis Fibroblasts，HDF)的体外增殖活性、β-半乳糖苷酶染色阳性率、细胞内活性氧类总量(Reactive oxygenspecies，ROS)、p53蛋白及MMP-1、MMP-3的mRNA表达等，探讨川芎嗪对长波紫外线(Utraviolet A，UVA)反复照射诱导人皮肤成纤维细胞衰老的可能作用及其机制，为其进一步成为光防护成分并应用于光保护剂提供理论依据。
　　方法:
　　第1部分:采用酶消化法从人包皮组织中分离培养成纤维细胞，对分离培养的细胞进行形态学鉴定，并选择合适的传代细胞进行实验;低剂量UVA反复照射人皮肤成纤维细胞，连续照射5天，每天10J，采用CCK-8法检测细胞增殖活性、染色法估算β-半乳糖苷酶表达量，探讨反复UVA辐射对人皮肤成纤维细胞的作用。
　　第2部分:采用不同浓度的川芎嗪预处理人皮肤成纤维细胞后进行反复低剂量UVA照射，连续照射5天，每天10J，光学显微镜下观察照射前后细胞形态的变化、CCK-8法检测细胞增殖活性、β-半乳糖苷酶染色，探讨川芎嗪对反复UVA辐射诱导人皮肤成纤维细胞衰老的拮抗作用，并采用流式细胞术检测细胞内ROS总量、Westernblot检测p53蛋白表达、实时荧光定量PCR法检测MMP-1、MMP-3的mRNA表达，探讨川芎嗪抗皮肤衰老的可能作用机制。
　　结果:
　　第1部分:原代培养细胞光镜下见细胞的形态从圆形、透亮逐渐伸展呈典型的梭形，并逐渐汇合成鱼群状，交织成网状，细胞生长快速、纯度较高，状态良好，符合为人皮肤成纤维细胞的生长形态。细胞生长潜伏期为0～1d，生长期为2～5天，平台期为6～7d;反复UVA照射人皮肤成纤维细胞可诱导其出现增殖缓慢、β-半乳糖苷酶染色阳性率增加等老化现象。
　　第2部分:川芎嗪对正常人皮肤成纤维细胞的体外增殖活性无明显促进或抑制作用，但对经反复UVA照射后人皮肤成纤维细胞的体外增殖活性有明显促进作用，并能降低其β-半乳糖苷酶染色阳性率，且具有一定的剂量依赖性，与UVA组的差异比较均有统计学意义（P＜0.05）。同时还发现川芎嗪能降低反复UVA照射诱导的人皮肤成纤维细胞内ROS总量升高，以浓度为50μ g/ml、100μ g/ml时明显，此两组细胞ROS值能降低至接近假照射组，与UVA组比较有均统计学差异（P均＜0.05）;UVA反复照射后人皮肤成纤维细胞内p53蛋白表达增加，与假照射组的差异比较有统计学意义（P＜0.05），而川芎嗪能降低UVA反复照射诱导的p53蛋白表达，与UVA组比较，UVA+川芎嗪100μ g/ml和假照射组的p53蛋白表达量差异有统计学意义（P均＜0.05），同时各川芎嗪浓度组的p53蛋白表达随着药物浓度的增加呈下降趋势。反复UVA照射人皮肤成纤维细胞可诱导其MMP-1、MMP-3的mRNA表达增加，与假照射组的差异比较均有统计学意义（P均＜0.05），而川芎嗪在一定浓度范围内能降低MMP-1、MMP-3的mRNA表达，与UVA组的差异比较均有统计学意义（P均＜0.05）。
　　结论:
　　川芎嗪对低剂量UVA反复照射诱导人皮肤成纤维细胞衰老具有拮抗作用，其机制可能与降低细胞内ROS总量、MMP-1、MMP-3的mRNA表达以及p53蛋白的表达有关。

目录

声明

摘要

引言

第一章 文献研究

1 紫外线与皮肤光老化的关系

2 中医药防治皮肤光老化的研究进展

3 川芎嗪与皮肤老化的关系

3 本课题的立项依据

第2章 实验研究

第1部分 长波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞衰老

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

第2部分 川芎嗪对长波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞衰老的拮抗作用及其机制研究

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

全文结语

参考文献

附录

在校期间发表论文情况

致谢