多重PCR方法快速检测血流感染患者血培养标本中主要革兰阴性杆菌方法的建立

摘要

目的:
　　建立可同时快速检测血流感染患者血培养中大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌3种主要革兰阴性杆菌的多重PCR方法。
　　方法：
　　回顾性分析福建省立院2014年1月份-2014年6月份202份血流感染患者血培养阳性标本中主要革兰阴性杆菌的分布情况；通过查找比对GenBank公布的大肠埃希菌O83:H1基因（NC-017634）、肺炎克雷伯杆菌 HS11286基因（NC-016845）、鲍曼不动杆菌Oxa基因（NC-009085），基因保守区设计各细菌的特异性引物。采用设计的3对细菌特异性引物，用已知标准菌株进行血培养，提取血培养瓶中的细菌DNA进行PCR扩增，建立多重PCR方法；用建立的多重PCR方法检测上述202份革兰阴性杆菌的血培养标本，鉴定结果与传统血培养鉴定结果进行配对ⅹ2检验。
　　结果：
　　血流感染患者血培养阳性标本排在前3位的革兰阴性杆菌为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌，所占比例分别为33.66％、21.78%、15.35%；建立的多重PCR方法，可扩增出相应的病原体基因，经过琼脂糖凝胶电泳，在特定位置显示相应目的条带，特异性强；用传统鉴定方法和多重PCR方法检测202份标本，P=0.125>0.01,一致性检验 Kappa=0.953，灵敏度为97.2%，特异度为100%，统计结果两种方法无差异。
　　结论：
　　建立了可同时快速检测血流感染患者血培养标本中大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌的多重PCR方法，耗时3～4小时，明显短于传统方法的鉴定时间。

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