二甲基乙二酰基甘氨酸对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖、凋亡、胶原合成的影响

摘要

目的：
　　研究二甲基乙二酰基甘氨酸（Dimethyloxalyl Glycine,DMOG）对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡及胶原合成作用，探讨在缺氧和常氧条件下，DMOG对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖、凋亡和胶原合成的作用机制。
　　方法：
　　利用不同浓度的DMOG作用于体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞，用MTT法检测它们的增殖水平的差异，求出药物半数抑制浓度（IC50）及最佳干预时间；并将瘢痕疙瘩成纤维细胞分为对照组、DMOG组（800μmol/L的DMOG）、缺氧组及缺氧联合DMOG组（缺氧+800μmol/L的DMOG）。
　　分别在缺氧和 DMOG两方面因素作用下，利用实时荧光定量 PCR法、Western-blot检测两种细胞中的 HIF-1α、Ⅰ、Ⅲ型胶原、凋亡相关蛋白p53、Bcl-2和 Bax的 mRNA、蛋白表达。利用 MTT法检测各组细胞的增殖水平，流式细胞仪检测细胞凋亡和周期。利用羟脯氨酸比色法检测评估各组细胞的胶原合成情况。使用统计分析软件进行数据处理和统计学分析。
　　结果：
　　随着浓度的增加（200μmol/L、400μmol/L、800μmol/L、1600μmol/L） DMOG对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖抑制呈剂量时间依耐性；得出药物半数抑制浓度（IC50）及最佳干预时间分别为800μmol/L和36h；
　　在瘢痕疙瘩成纤维细胞中，缺氧组、DMOG组和缺氧+DMOG组的HIF-1α的蛋白和mRNA的表达均较对照组高（P<0.01）；缺氧组、DMOG组和缺氧+DMOG组p53和Bax蛋白相比对照组均明显升高（P<0.01），Bcl-2蛋白表达均明显降低（P<0.01）；
　　MTT法检测细胞增殖抑制率，缺氧组、DMOG组和缺氧联合DMOG组较对照组细胞增殖均有一定的抑制作用，并且其中DMOG组和缺氧联合DMOG组，培养36h后细胞吸光度较对照组明显降低（0.54±0.01、0.29±0.02比1.01±0.02），（P<0.01）；
　　细胞凋亡检测显示DMOG组和缺氧+DMOG组相比对照组总凋亡率均明显升高（P<0.01），而缺氧组相比对照组总凋亡率也略微升高（P<0.01）；缺氧组、DMOG组和缺氧+DMOG组的 G0/G1期细胞比例较对照组明显增加（P<0.01）, S期细胞和G2/M期细胞比例均减少（P<0.01）。
　　相比对照组，缺氧组中的羟脯氨酸水平、Ⅰ、Ⅲ型胶原的 mRNA和蛋白均有所升高（P<0.05），DMOG组和缺氧+DMOG组中的羟脯氨酸水平COL1A1、COL3A1的mRNA和蛋白较对照组均明显降低（P<0.05）；
　　结论：
　　DMOG能抑制体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖，并成剂量时间依耐性；在缺氧条件下抑制作用更加明显；
　　DMOG能在一定条件下使体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞中的 HIF-1α合成水平增加，细胞发生DNA合成前期（G0/G1期）阻滞；
　　DMOG能促进体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡，并降低其胶原的合成水平。

目录

声明

前言

材料与方法

1.材料

2.方法

结果

1.瘢痕疙瘩成纤维细胞培养情况

2.MTT检测细胞增殖抑制率

3.不同分组条件下瘢痕疙瘩成纤维细胞中HIF-1α、Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA的表达

4.瘢痕疙瘩成纤维细胞分组间 HIF-1α、Ⅰ、Ⅲ型胶原、p53、Bcl-2 和 Bax蛋白的表达

5.噻唑蓝（MTT）检测增殖活性

6.流式细胞仪检测各组的细胞周期

7.流式细胞仪检测各组细胞凋亡

8.羟脯氨酸比色法检测各组胶原合成

讨论

1.DMOG对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

2.DMOG 对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞的 HIF-1α的表达及细胞周期的作用

3.DMOG对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞的凋亡的作用

4.DMOG对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的作用

结论

参考文献

综述:脯氨酸羟化酶与缺氧诱导因子研究进展

发表学术论文

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