基于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的免修饰电化学检测新方法研究与应用

摘要

目的:
　　建立一种高灵敏测定烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的直接电化学检测方法;基于NADH的直接电化学检测法，建立血清总胆汁酸浓度的免修饰电化学间接检测新方法并用于临床血清标本总胆汁酸浓度的测定和建立血清乙醇浓度的免修饰电化学间接检测新方法。
　　方法:
　　1.NADH的直接电化学信号检测:分别采用循环伏安法(CV)和示差脉冲伏安法(DPV)对烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)进行定性和定量分析。电极为丝网印刷电极(SPCE):工作电极和对电极由碳浆印制，参比电极为Ag/AgCl电极。
　　2.血清总胆汁酸浓度的测定:血清标本经蛋白沉淀后氮气吹干，用PBS复溶，复溶液加入3α-羟基类固醇脱氢酶（3α-HSD）溶液和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(NAD+)溶液混匀室温反应10min后滴加于丝网印刷电极上，用示差脉冲伏安法(DPV)进行测定。用该方法测定35例临床血清标本总胆汁酸浓度，并与临床酶循环法对比。
　　3.血清乙醇浓度的测定:用PBS对血清标本进行稀释后加入乙醇脱氢酶（ADH）溶液和NAD+溶液混匀，室温反应10min后滴加于丝网印刷电极上，用示差脉冲伏安法(DPV)进行测定。
　　结果:
　　1.SPCE检测NADH的线性范围为2.5×10-6～2.0×10-4mol/L，回归方程Y=0.125X-0.233，相关系数r=0.9992，最低检测限可达1.0×10-6mol/L。测定100.0μmol/L和10.0μmol/L的NADH溶液浓度的变异系数分别为1.5％和4.2％。
　　2.血清总胆汁酸测定的线性范围为5～400μmol/L，回归方程为Y=0.0038X+0.2739，相关系数r=0.9959，最低检出限为2μmol/L，日内变异系数和日间变异系数分别为1.1％～5.2％和3.2％～6.1％之间，平均回收率在75％～113％之间。35例临床血清标本总胆汁酸浓度分别采用该方法与临床酶循环法测定，相关性良好(r=0.9438)。
　　3.乙醇标准品测定的线性范围为7.5～250μmol/L，回归方程为Y=0.0064X+0.0747，相关系数r=0.9951;血清乙醇测定的线性范围为4～24mmol/L，校正曲线为Y=0.0918X+0.0705，相关系数r=0.9987，日内变异系数和日间变异系数分别为2.0％～4.1％和3.9％～4.6％之间，平均回收率在93％～102％之间。
　　结论:
　　1.免修饰SPCE直接检测烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)灵敏度高、重现性好、速度快。SPCE能进行批量生产，成本低廉，一次性使用，在制作脱氢酶传感器方面具有良好的应用前景。
　　2.本实验建立的血清总胆汁酸的电化学检测方法简单，传感器使用方便，价格低廉，可用于临床血清标本的总胆汁酸测定，并有助于便携式血清总胆汁酸传感器的开发。
　　3.本实验建立的血清乙醇的电化学检测方法，简单快速，成本低廉。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

第一章 直接电化学法检测烟酰胺腺嘌呤二核苷酸

1．引言

2．实验部分

3．结果与讨论

4．结论

第二章 电化学法检测血清总胆汁酸及临床应用

1．引言

2．实验部分

3．结果与讨论

4．小结

第三章 电化学法检测血清乙醇

1．引言

2．实验部分

3．结果与讨论

4．小结

参考文献

文献综述 丝网印刷电极的概述

致谢

攻读硕士期间发表的文章