重组幽门螺杆菌过氧化氢酶对实验性结肠炎大鼠肠黏膜的保护作用

摘要

背景与研究目的作者所在既往研究中克隆了制备了重组幽门螺杆菌过氧化氢酶(recombinant helicobacter pylori catalase,rHpCAT),活性远较常用的牛肝过氧化氢酶为高.该研究探讨了该酶对实验性大鼠肠炎的治疗作用与分子机制.内容包括: 1.rHpCAT对实验性结肠炎大鼠肠粘膜损害的保护作用;2.rHpCAT对肠粘膜细胞凋亡的影响;3.rHpCAT对肠粘膜细胞COX-2表达和核转录因子NF-κB激活的影响.方法1.用三硝基苯磺酸(trinitrobenzene sulfonic acid ,TNBS)制备SD大鼠实验性肠炎模型.随机分成5个组:正常对照组:饲以常规鼠粮,不作任何处理;模型组:用TNBS诱导制作成肠炎模型后,不作其他干预;5-氨基水扬酸(5-Aminosalicvlic acid,5-ASA)治疗组:大鼠制模后,用5-ASA灌肠干预;rHpCAT治疗组:大鼠制模后,用rHpCAT灌肠干预;rHpCAT预防组:在大鼠制模前,先用rHpCAT灌肠干预一周,大鼠TNBS诱导制模后,处理方法同rHpCAT处理组.在适当的时间点,用光学显微镜、电子显微镜等观察各组大鼠结肠粘膜的形态学变化.2.用TdT介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)和Hoechst 33258荧光染色标记法检测各实验组大鼠结肠粘膜细胞的凋亡指数.3.用免疫组化、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫印迹法(western blotting)检测环氧化酶2(COX-2)在各实验组大鼠结肠粘膜的表达情况.4.用电泳迁移率(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测环氧合酶2基因源核转录因子κB(nuclear factore κB,NF-κB)在各实验组大鼠结肠粘膜上皮的激活情况.5.用肠粘膜细胞LOVO细胞和SW480细胞体外制作氧化应激模型,用HpCAT干预,用2 ′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate(DCF-DA)标记各处理组的细胞,在流式细胞仪上检测各实验组肠粘膜细胞活性氧产生情况.结论1.rHpCAT能有效改善实验性肠炎大鼠的肠粘膜炎性损害,对肠粘膜具有保护作用,其效果与传统药物5-ASA相近或更好.2.rHpCAT能够抑制实验性肠炎大鼠肠粘膜细胞的凋亡,其中预处理组效果最佳,这可能是rHpCAT保护肠粘膜与抗炎的主要原因.3.rHpCAT能明显抑制肠粘膜细胞产生内源性ROS,下调肠粘膜上皮的COX-2表达,抑制NF-κB激活,这可能是rHpCAT抗炎的分子机制.

目录

英文缩略词表

前言

第一部分重组幽门螺杆菌过氧化氢酶对实验性结肠炎大鼠肠黏膜的保护作用

引言

材料与方法

结 果

讨 论

小 结

参考文献

第二部分重组幽门螺杆菌过氧化氢酶对结肠粘膜上皮细胞氧化应激的影响

引言

材料与方法

结 果

讨 论

小 结

参考文献

全文总结

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致 谢