龟甲胶、鹿角胶含药血清对豚鼠关节软骨细胞活性的影响

摘要

目的:
　　比较观察龟鹿二仙胶拆方中龟甲胶、鹿角胶含药血清对豚鼠关节软骨细胞的增殖及MEK1/2和ERK1/2表达的影响，进一步明确龟甲胶、鹿角胶对骨关节炎的防治作用，为探讨补肝肾中药促进软骨细胞增殖及防治骨关节炎提供新依据。
　　方法:
　　1.将48只Wistar大鼠随机分为4组（龟甲胶组、鹿角胶组、盐酸氨基葡萄糖组和对照组，分别计为G组、L组、A组和K组），并分别连续灌胃7天后，采血制备含药血清。
　　2.对三月龄豚鼠膝关节关节软骨细胞分离、培养及鉴定，并建立体外培养体系。
　　3.MTT比色法观察5％含药血清对各组豚鼠F2代软骨细胞增殖的影响。
　　4.ELISA检测MEK1/2、ERK1/2的表达。
　　5.荧光定量PCR测定软骨细胞MEK1/2、ERK1/2 mRNA的含量。
　　结果:
　　1.Ⅱ型胶原免疫组化染色和甲苯胺蓝染色均为阳性，提示成功建立豚鼠软骨细胞体外培养体系。
　　2.MTT比色法结果:龟甲胶、鹿角胶和盐酸氨基葡萄糖含药血清对软骨细胞均有促增殖作用，G组＞L组＞A组＞K组，(P＜0.05）。
　　3.ELISA法结果:龟甲胶、鹿角胶和盐酸氨基葡萄糖含药血清均能有效促进MEK1/2、ERK1/2的表达，其促表达效果均为G组＞L组＞A组＞K组，（P＜0.05）。
　　4.荧光定量PCR结果:龟甲胶、鹿角胶和盐酸氨基葡萄糖含药血清均能显著上调MEK1/2、ERK1/2基因的表达，且G组＞L组＞A组＞K组，（P＜0.05）。
　　结论:
　　龟甲胶和鹿角胶均可上调豚鼠关节软骨细胞MEK1/2和ERK1/2的表达水平，促进OA软骨细胞的增殖，且滋肾阴的龟甲胶作用强于补肾阳的鹿角胶。

目录

声明

摘要

中英文缩略词表

前言

实验内容

1 实验材料

1．1 主要试剂

1．2 主要仪器

1．3 实验动物

1．4．实验药材

2．实验方法

2．1 含药血清的制备

2．2 0A软骨细胞体外培养系的建立

2．3 MTT比色法检测各组含药血清对软骨细胞增殖的影响

2．4 Elisa检测各组含药血清对软骨细胞细胞内MEK1／2、ERK1／2表达的影响

2．5 荧光定量PCR检测各组含药血清对软骨细胞ERK1／2、MEK1／2 mRNA表达的影响

2．6 统计学分析

3．实验结果

3．1 龟甲胶、鹿角胶含药血清的制备

3．2 观察记录软骨细胞的生长情况

3．3 软骨细胞的鉴定

3．4 各组含药血清对软骨细胞活性的影响

3．5 细胞细胞内MEK1／2、ERK1／2表达的影响

3．6 各组含药血清对豚鼠软骨细胞MEK1／2、ERK1／2 mRNA表达的影响

4 讨论

4．1 以3月龄雌性豚鼠为原发性骨关节炎模型的原因

4．2 运用含药血清干预的理论依据

4．3 软骨细胞的分离、培养及鉴定

4．4 Elisa检测软骨细胞细胞内MEK1／2、ERK1／2的表达

4．5 MEKl／2、ERKl／2与软骨细胞的增殖的关系

4．6 探讨龟甲胶、鹿角胶提高软骨细胞活性的作用机制

5．结论

6．不足与展望

参考文献

致谢

综述

作者简历