树舌灵芝多糖提取分离纯化

摘要

经发酵得到树舌灵芝发酵全液，经提取得到粗多糖,对得到的粗多糖进行分级、纯化得到纯度较高的多糖样品，测定药理活性。树舌(Ganoderma applanatum)隶属真菌门(Eumycota)，担子菌亚门(Basidiomycotina),层菌(Hymenomycetes)，灵芝目(Ganodermatales)，灵芝科(Ganodermataceae)，灵芝属(Ganoderma)。rn 树舌为药用菌,性平，味苦,能祛风除湿，清热，止痛，化积，止血，化痰，民间多用以治疗急慢性肝炎、食道癌、胰腺癌、消化道溃疡、早期肝硬化，亦可治肠血泻血、热积胸痛、神经衰弱、消化不良、风湿性肺结核等，并有滋补功用。实验用的树舌灵芝多糖通过发酵得到。取0.5cm2的菌种块5～6块接入装有200mL培养基的500mL容量瓶中。接种后，在摇床上120r/min、25℃，振荡培养5d，作为液体菌种备用。30L发酵罐装培养基70％，高压蒸汽灭菌，接入液体菌种，接种量为10％，于25℃培养7d。第七天对发酵液进行处理，离心，浓缩，醇沉即得粗多糖。称取一定量的粗多糖，用sevage法除蛋白。粗多糖溶液加人sevage试剂(氯仿：正丁醇=4：1混匀)，使白质尽可能变性，反复除四五次蛋白，分离，获得下层的水溶液，此水溶液即为多糖溶液。用过氧化氢法除色素,在450C水浴中加入H2O2，使其颜色变为淡黄色。然后继续水浴使其H2O2分解产生的物质充分挥发掉之后，透析，冷冻干燥即为相对较纯的多糖。将冷冻干燥得到的多糖用蒸馏水溶解，配成溶液后，过葡聚糖凝胶柱(2.6×50cm),以蒸馏水为洗脱液,流速为1ml/min，自动部分收集器收集洗脱液10ml/管,以蒽酮-硫酸法测定洗脱液中多糖的含量。在10-20号管之前出现一个洗脱峰,为一个大的组分。30-35号出现一个小的组分，说明树舌灵芝多糖具有两个组分组成，并以前一个组分为主要成分。rn 发酵得到的树舌灵芝醇沉粗多糖经除蛋白、除色素、透析、冷冻干燥等得到相对较纯的多糖,经进一步分级可得分子量不同的组分，并对其组分进行活性研究。