大白菜黄萎病病原菌的分离鉴定及系统发育树的构建

摘要

本试验对北京地区大白菜育种田发生的一种新的病害—黄萎病的致病真菌进行了分离。通过形态学观察、致病力检测和rDNA-ITS序列分析进行了病原菌鉴定与系统发育树构建。从4个发病大白菜育种材料中分离纯化获得4个真菌分离物，命名为BCHw3-85、BcHE10-2、BCHW3-108和BCHWJ-15。分别在苗期回接4个寄主大白菜育种材料，苗期病症与发病田植株所表现的症状一致，四个菌的致病力存在一定的差异。分离物PDA培养菌落为白色，1周后中心变黑;显微镜下可观察到明显的轮枝状分生孢子梗，长椭圆形孢子;对BCHW10-2进行14℃-32℃温度培养，发现22℃生长最快;通过PCR扩增获得了4个分离物的rDNA-ITs序列，其一致性达100％，序列登录GenBank。Blastn比对表明，该病原菌的fDNA-ITS序列与番茄和棉花分离的Vetticillium dahliae的ITs区(GU461623、GU461609)的序列一致性达100％，推断该菌属大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)。运用MEGA4软件进行系统发育树构建，JN564038以99％的支持率与Venrticillium dahliae群聚为一支，遗传距离最近，而与Verticilliumalbo-atrum、Verticillium dahliae var.longisporum位于不同分支上，遗传距离较远。由此可见，大白菜黄萎病的致病菌为大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)。