猪流行性腹泻病毒M蛋白亲和肽筛选及其抗病毒作用

摘要

猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起猪的一种急性高度接触性胃肠道传染病,其临床特点为急性呕吐和严重腹泻,可导致新生仔猪的高死亡率.世界各地区PED广泛流行,经济损失影响重大.M蛋白是PEDV主要结构蛋白之一,具有高度保守性,是PEDV刺激机体产生免疫保护的重要蛋白之一,决定病毒粒子的装配位点、病毒成熟及出芽位点.另外,抗M蛋白抗体在补体存在的情况下可中和病毒感染活性.所以M蛋白特性研究对揭示PEDV感染机制及该病的综合防治有重要的意义.本文成功构建PEDV M蛋白的阳性重组表达质粒pET-32a-PEDV-M，将其在大肠杆菌表达系统中进行诱导表达，融合蛋白大小约为41ku，与预期大小相符。以表达纯化复性后的M蛋白作为靶蛋白，利用噬菌体展示随机十二肽库进行筛选，4轮淘选后，挑选10个与PEDV M蛋白特异性结合力高的噬菌体单克隆，序列测定并推导其氨基酸序列为AGWYCTEVLCV和AYCTRHVCYLDN，分别命名为M-2、M-9多肽。合成多肽的体外抗病毒试验中，间接免疫荧光和实时荧光定量PCR实验证明M-2、M-9及M-2与M-9多肽联合与PEDV作用都能够有效抑制病毒的复制，且都呈剂量依赖性。其中M-2多肽抑制病毒作用比M-9多肽高，两种多肽联合抗病毒作用最好。