实时荧光定量PCR检测凡纳滨对虾和罗氏沼虾卵黄蛋白原mRNA在卵巢和肝胰腺中的表达

摘要

本研究应用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR法检测凡纳滨对虾和罗氏沼虾卵巢不同发育时期的卵巢和肝胰腺中卵黄蛋白原mRNA的表达水平.根据卵巢发育情况把凡纳滨对虾的卵巢分为6个期:卵原细胞增殖期,卵黄发生前期,初级卵黄发生期,次级卵黄发生期,成熟期,恢复期.把罗氏沼虾的卵巢分为5个发育阶段:卵黄发生前期,初级卵黄发生期,次级卵黄发生期,成熟期,抱卵期.雌性凡纳滨对虾和罗氏沼虾分别提取卵巢和肝胰腺的总RNA,设计特异性引物进行荧光定量PCR扩增,对卵黄蛋白原mRNA表达进行相对定量分析.凡纳滨对虾的研究结果表明:在卵巢和肝胰腺中都有卵黄蛋白原mRNA的表达.在卵巢中,随着卵巢的发育,卵黄蛋白原mRNA的相对表达量不断增加,分别为:1.1,5.9,10.4,26.9,85.0,产卵以后急剧减少,为1.6.在肝胰腺中,随着卵巢发育,相对表达量不断增加,分别为:1.3,3.3,7.1,37.3,51.6,产卵以后急剧减少,为1.0.肝胰腺在次级卵黄发生期卵黄蛋白原mRNA增加明显,卵巢在成熟期卵黄蛋白原mRNA增加明显.罗氏沼虾的研究表明:在卵巢和肝胰腺中都有卵黄蛋白原mRNA的表达.随着卵巢的发育,肝胰腺中卵黄蛋白原mRNA的相对表达量不断增加,分别为:3.4,12.6,15.2,并在成熟期达到最大,为38.9,产卵以后为2.9,而卵巢在整个发育过程中对卵黄蛋白原合成的贡献比较小,分别为1.0,1.3,1.7,4.8,1.5,除成熟期外,其他各期差异不显著.