Rosa26位点自噬相关基因敲入小鼠模型的构建

摘要

运用CRISR/Cas9技术在小鼠基因组Rosa26位点处敲入mCherry、eGFP和mLC3B融合基因,构建可用于自噬研究的基因工程小鼠模型.设计并合成在CAG启动子调控下mCherry、eGFP和mLC3B融合基因重组表达载体作为供体质粒.根据Rosa26基因的外显子序列,设计一段sgRNA并合成.将sgRNA纯化后进行体外转录,取25μg/mL sgRNA、25μg/mL供体质粒和50μg/mL Cas9RNA混合,用显微注射仪将混合物注射到受精卵细胞胞质中.提取子代小鼠基因组DNA测序鉴定.结果表明：成功构建在CAG启动子调控下mCherry、eGFP和mLC3B融合基因供体质粒,与sgRNA和Cas9混合注射后得到6只基因敲入小鼠,测序结果表明其中1只小鼠敲入基因序列正确.在Rosa26位点处插入CAG、mCherry、eGFP和mLC3B融合基因,成功构建基因敲入小鼠.