外泌体介导miR-21-5p诱导巨噬细胞极化促进食管癌转移的研究

摘要

目的：研究食管癌细胞外泌体中miR-21-5p对巨噬细胞的极化作用,并探讨其对食管癌转移的影响,为食管癌的早期发生发展寻找生物标志物,提供基础研究依据. 方法：应用Western blot检测外泌体标志蛋白的表达;应用Cy3荧光标记miR-21-5p验证巨噬细胞对外泌体中miRNA的摄取;建立食管癌细胞与巨噬细胞的共培养体系,通过qRT-PCR验证miR-21-5p及M1、M2型巨噬细胞标志物表达水平;应用共培养后巨噬细胞培养上清作用与新的食管癌细胞,分别采用transwell穿膜法,Western blot检测食管癌细胞的迁移、侵袭能力及EMT相关分子表达. 结果：诱导人急性单核白血病细胞THP-1贴壁形成巨噬细胞;共聚焦显微镜拍摄结果显示,Cy3标记miR-21-5p可以通过外泌体进入受体细胞中;qRT-PCR结果显示共培养后,巨噬细胞(受体细胞)中miR-21-5p表达水平升高,且M2型巨噬细胞标志物表达升高(P＜0.05);巨噬细胞上清液作用于EC109后,发现细胞的迁移、侵袭能力与对照组相比提高(P＜0.05),EMT相关分子检测结果,实验组E-cadherin蛋白表达水平降低,N-cadherin、snail蛋白表达水平升高. 结论：肿瘤细胞分泌外泌体中,高峰度表达的miR-21-5p可诱导巨噬细胞M2型极化,进而促进食管癌细胞的转移,可作为食管癌转移的早期生物标志物.