雷公藤悬浮细胞原生质体的制备及瞬时转化体系的建立

摘要

目的：探索药用植物雷公藤悬浮细胞原生质体提取的最优条件,并建立雷公藤原生质体瞬时转化体系. 方法：以雷公藤悬浮细胞为材料,对酶解液配比、酶解时间、甘露醇浓度、处理转速等因素进行考察.用PEG介导瞬时转化法将外源基因转化到雷公藤原生质体中. 结果：雷公藤悬浮细胞为材料提取原生质体的最佳条件是：酶液配比为2.0％纤维素酶+0.5％果胶酶+0.5％离析酶,甘露醇浓度0.6mol/L,酶解时间10h,处理转速67×g;PEG介导含有编码GFP的植物表达载体转化雷公藤悬浮细胞原生质体,激光共聚焦扫描显微镜下细胞显示绿色荧光. 结论：筛选得到了雷公藤悬浮细胞原生质体的最佳提取条件,建立了雷公藤悬浮细胞原生质体的瞬时转化体系,为进一步开展雷公藤功能基因及合成生物学等研究奠定了基础.