CD133启动子调控新霉素抗性基因进行胶质瘤细胞U251细胞株CD133(+)细胞筛选

摘要

目的：应用CD133基因的启动子调控新霉素抗性基因在CD133+肿瘤细胞内的特异性表达,从胶质瘤U251细胞群体中筛选出CD133+的肿瘤干细胞.从而建立一种从胶质瘤细胞株分离肿瘤干细胞方法.方法：CD133基因启动子调控新霉素抗性基因(neo基因)的慢病毒栽体的病毒颗粒感染U251细胞,应用G418进行细胞克隆筛选,筛选后细胞应用荧光定量PCR技术检测CD133 mRNA水平的表达,流式细胞术检测示CD133阳性细胞率.结果：经过G418的筛选,2-3周内有细胞克隆长出,并在体外能够扩增这些克隆细胞,荧光定量PCR检测显示细胞CD133 mRNA水平的表达明显提高,其表达量比未分选的细胞提高3倍多;流式细胞检测结果显示CD133阳性细胞率为87％.结论：通过CD133启动子调控新霉素抗性基因在U251细胞株肿瘤细胞内的特异性表达能够有效获取CD133阳性的细胞.