以hTERT启动子为基础的新型单纯疱疹病毒的构建和功能研究

摘要

目的:近20年来,溶瘤病毒疗法已经被证实是一种新型有效的肿瘤治疗策略.构建了一种新型溶瘤单纯疱疹病毒oHSV1-hTERTp-ICP4,该病毒基因组中关键复制基因ICP4由肿瘤特异性启动子hTERT启动子调控,这使得该病毒具有只在肿瘤细胞而非正常细胞中选择性复制增殖的能力.并且,通过体内外实验评估了oHSV1-hTERTp-ICP4的溶瘤活性和肿瘤特异性.方法:构建了一株稳定转染pICP4的细胞系,该细胞系作为生产辅助细胞系稳定表达病毒关键复制性蛋白ICP4,用于oHSV 1-hTERTp-ICP4的构建及病毒生产.还构建了具有示踪作用的oHSV1-hTERTp-ICP4-CMVp-eGFP和oHSV1-hTERTp-ICP4-CMVp-Luc2.通过CCK-8细胞增殖实验检测oHSV1-hTERTp-ICP4对11种肿瘤细胞系和3种非肿瘤细胞系(WI-38,M and y)的杀伤能力;通过不同时间点的滴度测定确定oHSV1-hTERTp-ICP4在三种细胞系(U-2OS,Saos-2和TSU-PR1)中的增殖情况;用流式细胞术和激光共聚焦明确了oHSV1-hTERTp-ICP4对正常人血细胞的感染复制情况;用动物实验初步检测了oHSV1-hTERTp-ICP4在BGC823肿瘤模型中的抗肿瘤效果,并使用oHSV1-hTERTp-ICP4-CMVp-Luc2示踪检测了新病毒在荷瘤裸鼠中不同组织内的复制表达情况;通过实时定量PCR实验检测了oHSV1-hTERTpICP4感染细胞后对hTERT启动子活性的影响.结论:oHSV1-hTERTp-ICP4是一种安全性更好且具有良好溶瘤活性的新型溶瘤病毒,可以在癌症诊断和治疗中发挥强大的作用.