靶向抑制CXCR4对化疗耐受性腺样囊性癌细胞生物学特性的影响

摘要

目的:研究短发夹RNA(short-hairpin RNA, shRNA)干扰抑制趋化因子受体4(C-X-C chemokine receptor type4,CXCR4)的表达，对人化疗耐受性腺样囊性癌细胞NACC-DDP生物学特性的影响及其可能机制。rn 方法:顺铂诱导腺样囊性癌NACC细胞系获得耐药细胞NACC-DDPo Western Blot法比较亲本和耐药细胞间耐药蛋白P-gp的表达差异。构建靶向CXCR4基因的shRNA真核表达载体质粒，脂质体转染NACC-DDP细胞系。MTT法、克隆形成实验、Transwell法分别检测转染后细胞的增殖、克隆形成及侵袭力。qPCR,Western blot法检测细胞CXCR4,CD44,CD133 mRNA及蛋白表达。以转染后细胞建立裸鼠右侧腮腺原位移植瘤模型。隔日观察肿瘤体积，接种35天处死动物，取瘤称重，免疫组织化学法检测CXCR4,CD44,CD133,VEGF的阳性表达，CD34染色计算微血管密度。Western blot法检测移植瘤CXCR4,CD44,CD133表达。rn 结果:NACC-DDP细胞系在0.5μg/ml顺铂浓度下生长良好，该细胞耐药蛋白P-gP表达较亲本细胞升高。转染后，shCXCR4组细胞CXCR4,CD44 mRNA及蛋白表达，较其他各组显著降低，CD133在各组表达量均较少，且组间无显著性差异。转染后细胞增殖能力、克隆能力、体外侵袭能力明显受到抑制。裸鼠移植瘤体积及瘤重在shCXCR4组明显较其他各组小，P<0.01。移植瘤CXCR4,CD44,VEGF在shCXCR4组表达量明显低于其他各组，微血管密度减低、血管面积减少，CD133表达量较少，且组间无显著差异。rn 结论:靶向下调腺样囊性癌耐药细胞CXCR4可有效抑制细胞的增殖、克隆、侵袭、促新生血管生成、成瘤能力。提示CXCR4可成为耐药腺样囊性癌靶向治疗的一个位点。