SATB2修饰的iPS细胞诱导颅骨组织再生的研究

摘要

目的:初步阐明iPS细胞诱导成骨信号通路的机制，为颅颌面部缺损的骨组织再生提供理论和实验基础。rn 方法:滋养层MEF细胞的制备与培养，iPS细胞的培养与传代;HEK-293T细胞的培养，SATB2质粒体外转染，iPS细胞感染目的基因;基因转染效率、目的基因的转录及表达水平测定;SATB2基因修饰对iPS细胞成骨分化的影响;SATB2基因修饰的iPS细胞与丝素蛋白Silk Scaffold三维支架复合，修复裸鼠颅骨4mm直径基准大小缺损。rn 结果:iPS细胞经悬浮(滴)分化培养形成胚胎小体(EB)，转染SATB2或空白质粒(对照组)后，iPS细胞的多向分化潜能未发现发生改变;成骨诱导液继续诱导iPS细胞,14天后转染SATB2的iPS细胞(实验组)较对照组形成的矿化结节、ALP活性、成骨相关基因(osterix,Runx2,HoxA2,bone sialoprotein andosteocalcin)的表达均有显著性差异(p<0.05)。转染SATB2或空白质粒的iPS细胞与丝素蛋白支架复合修复裸鼠4mm直径颅骨缺损，5周后X线摄片、MicroCT扫描及组织学研究发现实验组较对照组新生骨形成、骨组织结构等均有.i}著性差异(P<0.05)。rn 结论:利用iPS细胞作为种子细胞，应用基因转染技术导人转录因子SATB2，在成骨诱导液培养条件下可以促进iPS细胞的成骨分化.SATB2修饰的iPS细胞与丝素蛋白三维支架复合后在体内可以促进裸鼠颅骨缺损的修复。