一种检测脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素(CRM197)结合物中游离多糖含量的方法

摘要

目的：建立一种脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素(A群、C群、Y群、W135群)结合物中游离多糖含量的检测方法.方法：根据脱氧胆酸钠(NaDC)在酸性条件下可沉淀蛋白的原理,对标准蛋白溶液进行酸沉淀处理,考察其蛋白沉淀效果;分别对脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素(A群、C群、Y群、W135群)结合物进行脱氧胆酸钠酸沉淀,检测其游离多糖含量;向脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素结合物中标加多糖衍生物,考察其准确度;向标准蛋白溶液中标加不同浓度的脱氧胆酸钠溶液,验证脱氧胆酸钠对于蛋白检测的干扰,考察其耐用性.结果：不同浓度的标准蛋白溶液经脱氧胆酸钠酸沉淀法处理后,蛋白浓度在100～300μg/ml范围内,沉淀中蛋白回收率为90％～110％,蛋白浓度大于300μg/ml的样品时,回收率显著降低;分别对脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素结合物中标加多糖衍生物,上清中多糖回收率为80％～110％.重复6次对脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素结合物进行游离多糖含量检测,其相对标准偏差(RSD)均低于15％;当溶液总中NaDC的浓度不高于2％时,对蛋白检测无干扰.结论：NaDC沉淀法能专一的沉淀蛋白,不沉淀多糖,该方法有较高的准确度和精密度,重复性好,可用于脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素结合物中游离多糖含量的测定.