GPC3基因重组慢病毒载体的构建及其在肝癌细胞中的表达

摘要

目的：构建含有GPC3的shRNA序列慢病毒表达载体并转染肝癌细胞,观察其转染效率及在肝癌细胞中的表达.rn 方法：应用重组DNA技术,将设计好的GPC3基因特异性siRNA序列构建至慢病毒表达载体pGLV3-GFP上,并应用脂质体法转染293T细胞,进行病毒包装及滴度测定.采用RT-PCR及Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测转染HepG2细胞后GPC3基因的表达情况.rn 结果：慢病毒载体构建成功,并测定滴度为1×108TU/ml.转染后,GPC3基因表达明显降低.rn 结论：成功构建GPC3基因的shRNA慢病毒载体其介导的RNAi能有效抑制靶细胞中GPC3基因的表达.