莫氏巴贝斯虫滑动体组件蛋白基因的克隆表达与多克隆抗体制备

摘要

为探讨莫氏巴贝斯虫滑动体的结构组成,该研究拟克隆和表达滑动体的部分组件蛋白,并制备多克隆抗体,为研究巴贝斯虫滑动体的结构功能及作用机制奠定基础.因此本研究利用末端快速扩增技术从莫氏巴贝斯虫裂殖子cDNA中扩增gap45、gap50、myo A、actin、aldolase、trap及mic基因,将获得的全长或基因的部分序列构建pGEX:4T:1原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)pLys中用IPTG诱导表达；融合蛋白经纯化后免疫家兔,制备多克隆抗体,用ELISA测定抗体的效价及反应性.同时应用western blot鉴定了该复合物组件蛋白在天然蛋白中的存在.研究结果显示,获得的莫氏巴贝斯虫gap45、gap50、myoA、actin、aldolase、trap和mic基因的全长分别为664bp、1391bp、773bp、1110bp、1199bp、2254bp和2538bp,开放阅读框长度分别为567bp、1194bp、606bp、1005bp、1074bp、2100bp和2514bp.利用重组蛋白免疫家兔制备的多克隆抗体具有较好的特异性,效介高于1:25600.而且一些免疫血清能够识别天然蛋白中的组件蛋白.该研究首次确定了滑动体在模式巴贝斯虫中的存在,并获得了相关的生物学材料,为后期研究巴贝斯虫滑动体的结构、功能以及巴贝斯虫入侵宿主细胞的机制奠定了基础.