柔嫩艾美尔球虫子孢子cDNA文库的建立

摘要

为对柔嫩艾美尔球虫子孢子阶段的基因克隆和分析研究.利用invitrogen的CloneMiner Ⅱ cDNAL-ibrary Construction Kit构建了柔嫩艾美尔球虫子孢子阶段的全长cDNA文库.用Invitrogen Trizol Reagent提出总RNA,用Fasttrack2.0试剂盒分离mRNA,以mRNA为模板进行cDNA双链的合成并对加重组接头和分级分离纯化,将分级分离纯化的cDNA与pDONR222载体进行重组反应,并将重组产物用电转化法转入DH10B感受态细胞内得到原始文库,扩增后保存于:80℃冰箱内.随机抽提质粒进行测序,在NCBI中利用BLAST进行比对,并利用与NCBI中ORF Finder软件对测序结果进行ORF的预测.经测定,构建的cDNA文库库容量约为0.5～1×107,平均平均插入片段大于1.0 kb,重组率大于85％,全长比例大于50％.随机选取20个克隆测序中含有EtMICl、EtSERPIN1及其他与弓形虫高度类似的基因.本研究成功构建了柔嫩艾美尔球虫高质量的子孢子全长cDNA文库,从而为研究相关的功能基因奠定了基础.