鸡球虫EtMIC1和EtMIC2单抗制备及初步应用

摘要

本研究制备了EtMIC1、EtMIC2单克隆抗体,并通过其与感染了卵囊的不同天数的鸡球虫发育阶段不同的盲肠切片免疫荧光实验,研究柔嫩艾美耳球虫各个阶段EtMIC1和EtMIC2表达情况.利用真核表达的EtMIC1、EtMIC2原核全长蛋白作为免疫原,经典方法筛选、鉴定分泌单克隆抗体的阳性细胞株.分别制备单抗,用于球虫不同发育阶段EtMIC1和EtMIC2表达情况.取新鲜卵囊机械破碎出孢子囊,常规方法制备活化子孢子,采用间接免疫荧光检测EtMICl&2的表达情况.卵囊感染鸡,在130小时剖杀,取盲肠组织制备石蜡切片,然后进行间接免疫荧光试验,观察单克隆抗体是否与裂殖体或裂殖子反应.检测确定反应后,单抗可用来检测球虫生活史微线蛋白EtMIC1和EtMIC2的变化.本研究成功制备了抗真核蛋白EtMIC2单抗2株:9-b9、4-ell;抗EtMIC1原核全长蛋白单抗1株:1-h2,它们均与球虫生活史阶段的的子孢子和裂殖体反应,为进一步研究柔嫩艾美耳球虫各个阶段EtMICl和EtMIC2表达情况奠定了基础.