本研究旨在寻找猪囊尾蚴发育过程中的关键酶-半胱氨酸蛋白酶在猪体内不同时期的表达情况进,为阐明猪囊尾蚴的代谢规律奠定理论基础.本实验建立了猪囊尾蚴实验动物模型,实验前,用醋酸地塞米松免疫抑制实验小鼠,通过口服激活、未激活囊尾蚴和尾静脉注射激活的囊尾蚴三种方式感染昆明小鼠、BALB/c小鼠、SD大鼠、豚鼠、金黄地鼠、沙鼠,对各种鼠体内的绦虫的感染、发育和生长部位等特性进行研究.在感染45天的3只金黄地鼠体内检出可见虫体,虫体多数吸附在小肠上.结果成功的构建了猪带绦虫金黄地鼠实验动物模型,从本质上解决实验材料的问题,同时为猪带绦虫病的研究打下了良好的基础.通过猪体内繁殖猪囊尾蚴的方法,分别取感染了40天、60天、90天的猪囊尾蚴虫卵,Trizol法分别提取三个不同时期猪囊尾蚴总RNA,用Primer Premier 5.0软件设计引物,RT-PCR扩增猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶基因,产物纯化后与pMD18:T载体的连接转化,质粒测序,利用重组质粒制作荧光定量PCR标准曲线,进行荧光定量PCR反应.猪在感染猪带绦虫孕节片40d,取出的囊尾蚴中已经有半胱氨酸蛋白酶产生,随着感染时间的增加,猪囊尾蚴CP表达量也有所增加,在感染60d时,猪囊尾蚴基本成熟,到了感染90d时,半胱氨酸蛋白酶的表达量趋于平稳状态.
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