牛源犬新孢子虫NcGRA7基因的克隆及原核表达分析

摘要

为了解牛源犬新孢子虫NcGRA7基因的生物学特性.本试验应用PCR技术扩增牛源犬新孢子虫NcG-RA7基因,将PCR产物连接到pMD-18T Simple Vector载体,构建pMD 18-NcGRA7克隆质粒,经PCR鉴定、酶切鉴定及测序分析后,将NcGRA7基因连接到原核表达载体pGEX-4T-1上,构建重组表达质粒pGEX-N-cGRA7,转化大肠杆菌BL21,筛选阳性克隆,将PCR鉴定和酶切鉴定正确的重组质粒进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western-blot分析表达产物.结果表明,扩增的NcGRA7基因片段大小为701bp,编码233个氨基酸,与GenBank中发表的NcGRA7(AF 176649)核苷酸序列同源性为98.7％;Western blot分析表达蛋白的分子量为52 ku,具有较好的免疫活性.本试验为犬新孢子虫NcGRA7基因疫苗的研究奠定了基础.