蔬菜、水果表面环孢子虫卵囊检测方法的建立

摘要

本研究旨在建立检测蔬菜、水果表面人源环孢子虫卵囊的方法.采用5.0×101个、5.0×102个、5.0×103个、5.0×104个不同数量梯度的环孢子虫卵囊对洗净的蔬菜、水果进行人工污染,并设置阴性对照；使用Alconox、雕牌、立白、白猫四种不同的洗涤剂以及去离子水,在摇床中洗涤；然后采用反复离心沉淀法对卵囊进行收集；最后基于环孢子虫18SrRNA基因位点对洗脱后收集到的卵囊进行PCR扩增.结果发现,只用100mL去离子水时,生菜、西葫芦、黄瓜、西瓜、甜瓜和草莓的最低检测浓度都是5.0×101个,而西红柿为5.0×102个；当用不同洗洁精时,检测灵敏度均能达到5.0×101个,不同洗涤剂洗脱结果无显著性差异,生菜、西葫芦、黄瓜、西瓜和甜瓜的最佳样品质量为15g,草莓为509,西红柿为100g;最佳洗脱时间为30min.本研究建立了一种检测蔬菜水果表面环孢子虫卵囊的检测技术,为食源性环孢子虫的溯源提供技术支持.