柔嫩艾美耳球虫小热激蛋白(sHSP)的分子鉴定与分析

摘要

本实验根据BWl-B02的EST序列,利用RACE技术扩增获得了一个含完整开放阅读框的cDNA序列,结果显示其具有1个HSPs家族alpha-crustallin-HSPs_p23-like superfamily的保守结构域.与柔嫩艾美耳球虫基因组进行同源性比对,发现该基因与柔嫩艾美耳球虫的Hsp20有高度同源性,为了进一步研究该蛋白在虫体发育过程中的功能,将获得的EtsHSP基因与原核表达质粒pET-28a(+)连接,构建重组表达质粒(pET28a(+)-EtsHSP)后转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导表达获得了重组表达蛋白rEtsHSP.用获得的重组蛋白免疫兔制备了兔抗rEtsHSP的多克隆抗血清.Western blot分析显示制备的兔抗rEtsHSP多克隆抗血清能识别大约20 kDa的虫体天然蛋白,且蛋白的表达在孢子化卵囊阶段高于其他3个阶段.利用间接免疫荧光抗体标记对EtsHSP在柔嫩艾美耳球虫子孢子的分布进行了分析,发现该蛋白主要位于细胞核周围.体外抑制试验结果显示,子孢子与所制备的抗体孵育后,其入侵DF-1细胞的能力减弱.以上研究结果,为进一步深入研究球虫sHSP的功能提供了重要参考依据.