利用CRISPR/Cas9技术制备白化小鼠

摘要

目的：本研究选择可视化毛色表型作为观察指标,应用CRISPR/Cas9技术敲除C57BL/6J小鼠酪氨酸酶基因(Tyrosinase gene,Tyr)致其黑色素合成障碍以制备白化表型小鼠,快速熟练掌握CRISPR/Cas9技术. 方法：分别从质粒pX330-Cas9、pX330-Tyr4a和pX330-Tyr4b PCR扩增Cas9和sgRNA体外转录用模板,接着体外转录出Cas9mRNA和sgRNA,最后Cas9mRNA和sgRNA共注射入C57BL/6J小鼠受精卵的胞质内,以制备TYR基因敲除小鼠. 结果：胞质内共注射后,共移植255枚受精卵至9只假孕母鼠.获得子代小鼠20只,其中4只毛色为白色,7只毛色为黑白相间,9只毛色为黑色. 结论：本研究成功制备了白化小鼠,预示已初步掌握CRISPR/Cas9技术,这为利用CRISPR/Cas9技术制备其它基因修饰动物(如小型猪)奠定了坚实基础.