鹿结核病野毒株与卡介苗差异基因文库的构建

摘要

应用四碱基限制性内切酶对鹿结核病流行株和卡介苗基因组分别酶切,以鹿结核流行株酶切产物为tester DNA,卡介苗酶切产物为driver DNA,tester DNA接头连接后与driver DNA进行抑制性消减杂交.将获得的消减PCR产物与pMD-18连接,JM109感受态细胞,进行蓝白斑筛选.结果:RsaI酶切产生的酶切产物在0.1～2.0kb之间,将消减PCR产物克隆后,挑取208个转化子,构建了鹿结核病流行株与卡介苗的差异基因文库.结果表明,应用抑制性消减杂交技术,成功的构建了鹿结核病流行株与卡介苗基因组差减文库.应用制性消减杂交技术构建鹿结核病野毒株与卡介苗基因组差减文库,为鹿结核病自然感染和卡介苗免疫的鉴别诊断及鹿结核病的综合防制奠定了基础.