冷冻保护剂添加/洗脱过程对猪MⅡ期卵母细胞的损伤研究

摘要

在卵母细胞的低温保存过程中,高浓度冷冻保护剂的添加和洗脱是一个必不可少的步骤.但冷冻保护剂的添加与洗脱过程会对细胞造成渗透损伤和毒性损伤.为了优化冷冻保护剂的添加过程与洗脱过程,减小细胞损伤,本研究对猪MⅡ期卵母细胞进行冷冻保护剂的添加和去除,考察了细胞冷冻/解冻液的渗透压对细胞存活率的影响,与此同时,讨论了卵母细胞在冷冻液、溶解液中的暴露时间和溶解液浓度对细胞存活率的影响.结果表明:在冷冻保护剂添加和洗脱过程中,冷冻/解冻液间的渗透压差是导致细胞损伤的重要因素,卵母细胞从玻璃化溶液VS2中转移至溶解液中,细胞的存活率会显著减小;当细胞在冷冻液VS2中平衡30s时,转移至1mol/L的溶解液中平衡120s,细胞的存活率显著高于其他组,可以达到80.6％;细胞在冷冻液VS2中暴露不同的时间,需要选择不同浓度的溶解液,也充分说明了卵母细胞的溶解过程与保护剂加载过程是相关的.