水牛Smad4基因的克隆及真核表达载体的构建

摘要

Smad4是Smad蛋白家族中的重要成员,在TGF-β/Smad的细胞信号转到中起着关键作用,为了阐明Smad4基因对水牛卵巢颗粒细胞增殖及胚胎发育的分子机制,本试验采用RT-PCR技术,克隆水牛Smad4基因,并对其核苷酸序列和蛋白质序列进行生物信息学分析,并构建Smad4基因的真核表达载体,并通过脂质体转染法转染体外培养的牛卵巢颗粒细胞.结果表明:克隆得到水牛Smad4基因编码序列,编码区全长为1662bp,编码553个氨基酸.通过BLAST对水牛Smad4基因的核苷酸序列进行同源性比较,结果显示水牛Smad4基因的与牛的同源性为99％,与绵羊、猪、马、人的同源性分别为:98％、96％、96％和95％,系统进化树分析表明Smad4基因在不同物种的进化过程中具有高度的保守型,试验成功构建了水牛Smad4基因的真核表达载体pEGFP-N1-Smad4.本研究成功克隆了水牛Smad4基因,并成功构建了Smad4基因的真核表达载体,为进一步研究Smad4基因在水牛胚胎发育过程中的分子机制奠定了理论基础.