大草蛉Chrysopa pallens (Rambur)触角cDNA文库的构建

摘要

本文以羽化3天内的大草蛉Chrysopa pallens (Rambur)雌雄触角为材料提取总RNA,以此为模板,通过SMARTscribeTM Reverse Transcriptase反转录酶反转录合成第一链cDNA,引物扩增获得双链eDNA,经CHROMASPIN+TE-1000Column分级分离后,收集0.4-2.0kb之间的片段重组于质粒载体pSMART2IFD并电转化至大肠杆菌Escherichia coli DH5α,最终构建获得大草蛉雌雄触角全长cDNA文库.结果显示构建的雌雄触角cDNA初级文库滴度分别2.1×106pfu/mL和1.8×106 pfu/mL,重组率均达到93.0％以上,插入cDNA的片段大小范围为0.4-2.0kb,主要集中在0.5-1.0kb,平均长度为549.0bp,表明构建获得的文库质量较高,可保证大规模全长cDNA的获得.该文库的构建丰富了大草蛉基因序列信息,为大量克隆大草蛉嗅觉相关基因,深入揭示大草蛉嗅觉识别机制奠定基础,也为合理利用大草蛉进行生物防治提供理论依据.