色氨酸对猪原代肝细胞IGF-Ⅰ分泌及表达的调控

摘要

采用Seglen改良的胶原酶两步原位肝脏灌注法,分离获取猪原代肝细胞.分别用含0,4,16,48mg/L色氨酸浓度的无血清培养液培养肝细胞,培养0(用含血清的DMEM培养24h后),8,16,24h每处理取1mL培养液,用IRMA法测定溶液中的IGF-Ⅰ浓度;培养24h后收集细胞,用Trizol提取总RNA,斑点杂交检测IGF-Ⅰ、GHR、IGF-Ⅰ受体与IGFBP-3 mRNA丰度.在培养0h和8h后,各处理IGF-Ⅰ的浓度无显著差异;在16h时,0与4mg/L处理组IGF-Ⅰ水平显著低于16与48mg/L组(P<0.01);在24h时,IGF-Ⅰ分泌水平随着色氨酸浓度的增加而急剧增加(P<0.01).随着培养液中色氨酸浓度增加,IGF-Ⅰ、GHR、IGF-Ⅰ受体mRNA丰度随之增加,而IGFBP-3mRNA丰度则降低(P<0.01).相关分析表明,色氨酸浓度与IGF-Ⅰ、GHR、IGF-Ⅰ mRNA水平呈正相关(P<0.01),与IGFBP-3 mRNA水平呈负相关(P=0.01).结果表明:在体外,培养基中色氨酸水平显著影响了肝细胞IGF-Ⅰ浓度与IGF系统基因表达,说明色氨酸直接抑制或促进了肝脏IGF-Ⅰ的分泌与释放.