青藤碱对胶原诱导性关节炎小鼠髓系来源的抑制性细胞干预作用

摘要

目的:在胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠模型中,观察中药青藤碱(sinomenine,SIN)对髓系来源的抑制性细胞(myeloid derived suppressor cell,MDSCs)及亚群(M-MDSCs和G-MDSCs)的影响,探讨MDSCs在CIA发病中的作用.rn 方法：C57BL/6雄性小鼠30只，8～10周龄。用2mg/mlⅡ型胶原与弗氏完全佐剂等体积混合乳化，于小鼠尾根部多点皮内注射100ul乳剂，诱导CIA模型。免疫后第14d，行加强免疫一次。将造模成功小鼠分为实验组(n=10)和对照组(n=9)，实验组于初次免疫后的第30d起每日给予SIN100mg/kg 灌胃，对照组给予PBS，至第42d观察结束。初次免疫后每周3次进行小鼠关节炎评分。观察结束后，乙醚麻醉后脱臼处死小鼠，收集小鼠双侧后肢，常规脱钙，随后进行关节滑膜组织的固定、脱水、透明、透蜡、包埋、切片以及H&E染色。对炎症细胞的浸润、软骨的破坏和骨侵蚀三方面进行关节滑膜病理评分。流式细胞术检测小鼠外周血和脾细胞MDSCs及脾细胞G-MDSCs和M-MDSCs水平。采用SPSS13.0统计软件进行数据分析，计量资料用（x±s）表示。正态分布计量资料总体比较采用独立样本t检验和重复测量的方差分析，以双侧P＜0.05为差异有统计学意义。rn 结果：①与对照组相比，SIN干预后CIA小鼠外周血、脾细胞MDSCs水平下降（P均＜0.05），差异具有统计学意义。②SIN干预后CIA小鼠脾细胞G-MDSCs水平与对照组相比，差异无统计学意义（P＞0.05），而脾细胞M-MDSCs水平降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）。③治疗组和对照组关节炎评分各时间点之间差异具有统计学意义（F=11.15，P=0.001），时间和分组之间存在交互作用（F=6.93，P=0.005），治疗组随着干预时间的延长，关节炎评分逐渐降低（F=6.01，P=0.02），而对照组则无变化。d35和d38时，SIN干预组与对照组相比，关节炎评分无差异（P=0.90和P=0.16）；d41时，与对照组相比，SIN干预组显著降低关节炎评分（P=0.04）。SIN干预组，d35与d38、d38与d41之间关节炎评分无差异（P=0.51和P=0.10），而d35与d41之间关节炎评分显著降低（P=0.04）。④SIN干预可显著降低关节病理评分，该组关节炎性细胞的浸润、软骨破坏及骨侵蚀改善均优于对照组，差异具有统计学意义（P均＜0.05）。rn 结论：SIN干预可减少MDSCs及亚群M-MDSCs在CIA小鼠体内的聚集，减轻CIA的严重程度，MDSCs可能成为类风湿关节炎新的治疗靶点。