青霉素结合蛋白变异与肺炎链球菌耐药关系研究

摘要

目的:初步探讨临床分离肺炎链球菌青霉素结合蛋白(PBPs)基因变异与肺炎链球菌耐药关系. 方法:分别对15株临床分离的肺炎链球菌进行MIC测定;采用CTAB法分别提取每株细菌膜蛋白DNA模板,应用PCR技术进行扩增,对获得的基因扩增产物进行测序. 结果:通过对15株临床分离肺炎链球菌的MIC测定,得到青霉素敏感肺炎链球菌(PSSP)4株,青霉素中敏肺炎链球菌(PISP)6株,青霉素耐药肺炎链球菌(PRSP)5株;提取膜蛋白模板,PCR扩增并测序,获得15株临床分离肺炎链球菌PBP1a、PBP2b、PBP2x的全基因序列.PSSP的PBP1a、PBP2b和PBP2x氨基酸片段与标准菌株R6高度一致,提示PSSP在PBPs中未发生导致氨基酸替代的点突变;而多数PISP的PBP1a、PBP2b和PBP2x也未发生明显变异;PRSP发生的点突变较多,尤以PBP1a和/或PBP2x为主,PBP1a基因耐药突变中,以S370TMK区域的Thr371→Ala/Ser替代最为多见,PBP2x突变导致靠近S395SN区域的His394→Tyr/Leu,S337TMK区域的Thr338→Ala/Gly/Pro发生替代. 结论:在肺炎链球菌产生耐药的关键青霉素结合蛋白基因的点突变中,常见PBP2b单一位点突变导致较低水平耐药,多见青霉素中敏肺炎链球菌;而以PBP1a和/或PBP2x为主的基因突变,则导致高水平耐药,多见青霉素耐药肺炎链球菌.